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bluesr

木虫 (初入文坛)

[求助] [求助]有关高分子膜材料的蛋白吸附检测

我做的高分子聚合物成膜后想做一下它的表面蛋白吸附。自己用BCA蛋白试剂盒做完,每次按照说明书操作,在洗脱这一项总是觉得没洗干净。就是测出的结果在1—3μg/cm2这个级别,我的材料是是油溶性的,所以我自己做的是用白蛋白。我也没做过,总感觉过高.就想问问大家,这个是不是值太高了?还有能不能有其他的测试方法,最好有没有实验室可以提供蛋白检测的?能不能帮做一下,老板说了出测试费也行的。谢谢。
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lins79

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


bluesr(金币+5): 感谢 2011-11-30 21:39:21
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-01 16:45:05
可以试试酶联免疫吸附法
2楼2011-11-29 21:04:14
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rainbows1

禁虫 (著名写手)


bluesr(金币+5): 感谢 2011-12-01 12:27:44
lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-01 16:45:14
本帖内容被屏蔽

3楼2011-12-01 12:16:31
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bluesr

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by rainbows1 at 2011-12-01 12:16:31:
不算高,取决于吸附用的蛋白浓度。一方面可以用曲拉通洗脱测洗脱液的浓度,一方面也可以测吸附前后溶液中蛋白浓度变化。两者相比较之后就知道是不是洗脱干净了。

蛋白浓度用的是4.5mg/mL,这样测出来1-3μg/cm2,也不算高吗?
测吸附前后溶液中蛋白浓度变化 这个怎么测呢?谢谢啊
4楼2011-12-01 12:26:56
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rainbows1

禁虫 (著名写手)


lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-01 16:45:24
bluesr(金币+5): 谢谢,还有问题,麻烦再解答一下。 2011-12-02 13:45:26
本帖内容被屏蔽

5楼2011-12-01 15:12:55
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bluesr

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by rainbows1 at 2011-12-01 15:12:55:
我用BSA,0.1mg/ml~1mg/ml。太高了就吸附饱和了,而且测定误差比较大。用低浓度的时候,测吸附前后溶液比较准确。就是吸附前溶液取个样,吸附完了把材料捞出来,溶液再取样测一下,两者相减就是被吸附掉的量。如果 ...

按BCA就是先吸附,然后再用PBS洗掉表面并未吸附的蛋白溶液,然后置于洗脱液中洗脱,测定洗脱下来的蛋白浓度即为吸附浓度。我主要疑惑用PBS洗掉表面并未吸附的蛋白溶液,这一步有没有洗干净?
如果测试吸附前后溶液浓度的话,把材料捞出时表面难道不会带走一些并没有吸附的蛋白溶液吗?这样的话浓度测定会不会不准?还有如果不用BCA显色测其吸光度之类的话,怎么测定蛋白浓度呢?就是用什么值表示蛋白的量。我不懂这个啊,问的有点基础,麻烦了。
6楼2011-12-02 13:54:36
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rainbows1

禁虫 (著名写手)


lixiangde(金币+1): 感谢回帖交流 2011-12-02 23:06:29
bluesr(金币+20): 多谢多谢~~ 2011-12-04 21:07:09
本帖内容被屏蔽

7楼2011-12-02 18:28:19
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东啸长安

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by rainbows1 at 2011-12-01 15:12:55
我用BSA,0.1mg/ml~1mg/ml。太高了就吸附饱和了,而且测定误差比较大。用低浓度的时候,测吸附前后溶液比较准确。就是吸附前溶液取个样,吸附完了把材料捞出来,溶液再取样测一下,两者相减就是被吸附掉的量。如果浓 ...

我和这位美女做的差不多,都是用低浓度的BSA溶液,测吸附前后的浓度变化!不过我用的是考马斯亮蓝染色法测量蛋白质吸附量!
8楼2013-05-23 21:18:50
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