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新虫 (小有名气)

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[交流] 有木有谁建立细胞株的呀，求经验

将目的基因导入肿瘤细胞建立稳定表达该基因的细胞株，用药物G418进行筛选，但是效果不理想，在进行两次加药处理（约三天）后，对照组细胞（没有转染目的质粒的）竟然比实验组还多，这是为什么呢，求解，我按照之前老师做过的，细胞百分之八十进行转染，二十四小时后换液，二十四小时后加药筛选的。

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1楼 2014-08-17 12:04:44

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

1 不同细胞株对G418的耐受浓度时不一样的，即使相同细胞株，在不同实验室的耐受浓度也不会完全一致，更何况G418B不同厂家，不同批次的活性都是不一样的。所以在筛选之前，要摸索细胞株对G418的耐受浓度，一般是找连续培养2周，细胞刚好全死的浓度。
2 3天是看不出效果的，G418是抑制蛋白的合成，人如果2天不吃蛋白，只吃糖类，也不会死的。细胞也一样。3天就死，你也小看生命的韧性了。
3 对照组细胞（没有转染目的质粒的）竟然比实验组还多，可能的原因，如果G418的时间和浓度都很低，就不考虑G418的毒性。对照组的质粒少了目的基因，要产生的蛋白就少，代谢负荷就小，长得当然快了！