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14_812

新虫 (小有名气)


[交流] 有木有谁建立细胞株的呀,求经验

将目的基因导入肿瘤细胞建立稳定表达该基因的细胞株,用药物G418进行筛选,但是效果不理想,在进行两次加药处理(约三天)后,对照组细胞(没有转染目的质粒的)竟然比实验组还多,这是为什么呢,求解,我按照之前老师做过的,细胞百分之八十进行转染,二十四小时后换液,二十四小时后加药筛选的。
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1 不同细胞株对G418的耐受浓度时不一样的,即使相同细胞株,在不同实验室的耐受浓度也不会完全一致,更何况G418B不同厂家,不同批次的活性都是不一样的。所以在筛选之前,要摸索细胞株对G418的耐受浓度,一般是找连续培养2周,细胞刚好全死的浓度。
2 3天是看不出效果的,G418是抑制蛋白的合成,人如果2天不吃蛋白,只吃糖类,也不会死的。细胞也一样。3天就死,你也小看生命的韧性了。
3 对照组细胞(没有转染目的质粒的)竟然比实验组还多,可能的原因,如果G418的时间和浓度都很低,就不考虑G418的毒性。对照组的质粒少了目的基因,要产生的蛋白就少,代谢负荷就小,长得当然快了!
15楼2014-08-17 16:45:30
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)



14_812(金币+1): 谢谢参与
路过的,瞅瞅!
2楼2014-08-17 12:12:17
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)



14_812(金币+1): 谢谢参与
三天时间太短,也许细胞毒性作用尚未发挥,此时细胞多少无意义,至少给一个星期的时间再说。
另外,你所用的G418浓度是否合适,以前有否测试过?
3楼2014-08-17 12:19:19
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for5

木虫 (正式写手)



14_812(金币+1): 谢谢参与
没一个月你想三天做好?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
8楼2014-08-17 13:03:11
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