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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 养细胞的技术，心得
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)

[交流] 养细胞的技术，心得

各位大虾希望你们能够把在养细胞中遇到的问题，得出的经验分享给大家和我，小弟不胜感激！
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1楼 2011-09-19 11:05:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sxxuan

金虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 很热心，破格鼓励 2011-09-23 12:34:53
养了一年的细胞，不过都是养传代细胞，没试过自己做原代细胞培养。只是一些简单的实验，不涉及细胞药物处理及转染亚克隆之类的。说说自己的心得，仅供参考。
1. 每养一种细胞之前，都请教养过的人或上网搜一下相关的资料，了解一下这个细胞的培养条件及注意事项。丁香园在这方面的信息是要比小木虫要多的。
2. 注意每一步的操作都防污染。有人说打开盖上瓶口都在酒精灯上烧其实不好因为影响pH值，但我觉得还是很有必要的，培养基放进培养箱后pH会改变的，个人觉得影响不大。东西拿进生物安全柜都要喷酒精擦干，手也常喷酒精。不要在防污染这方面存在侥幸心理觉得这次没事下次也继续，我就试过，惨痛的经历让我连续加了一个月班的实验结果付诸东流。
3. 消化时间不要过长，观察细胞形状变圆还贴在皿底就可以了。把胰酶吸掉再加培养基吹打会比较好。
4. 每种细胞的消化时间有所不同，这个要自己去总结经验。同事教我用PBS把胰酶稀释一倍，这样比较好把握消化的时间。
5. 论坛上很多人分享经验说吹打十多次，但我每次都要吹很多次才能吹匀，不知何解。气泡也不能避免，后来就把气泡吸走或直接把培养液吸到新的培养皿里。
6. 好多知识或注意事项都是上网搜的，多上论坛好处多。
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13楼2011-09-23 12:14:41
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l-c-l

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-23 12:34:28
最要命的是碰到细胞怎么样都半死不活的，老化严重。可以亚克隆。 天气热了小心黑胶虫，过滤没用的[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

[ Last edited by l-c-l on 2011-9-22 at 23:23 ]
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10楼2011-09-22 23:22:44
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ixido

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+3): 很有用哦 2012-02-15 10:59:01
注意自己的无菌操作，这是最主要的。自己的东西自己用，不管是培养基，还是胰酶PBS，快用完了的时候一定要提前准备，不能临到用的时候发现没有了到处借，结果出问题了也不能找到原因。
剩下的就是使用的东西的问题了，能用好的试剂就用好的，自己配的东西也要好好过滤灭菌，不要图省事就犯懒。血清的质量一定要掌控好，别的东西凑合还能接受，血清一定要用质量好的。
其实，养细胞就遵循一句话就好了：养细胞就像养自己的儿子一样
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24楼2012-02-14 17:08:22
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by ixido at 2012-02-14 17:08:22:
注意自己的无菌操作，这是最主要的。自己的东西自己用，不管是培养基，还是胰酶PBS，快用完了的时候一定要提前准备，不能临到用的时候发现没有了到处借，结果出问题了也不能找到原因。
剩下的就是使用的东西的问 ...

虽然还没儿子，以后一定会比养儿子还要上心，谢谢你
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25楼2012-02-14 18:00:42
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独醉

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么开始养的时候很好，后来就不行了啊?
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27楼2012-09-21 17:21:38
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x452659189

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
24楼: Originally posted by ixido at 2012-02-14 17:08:22
注意自己的无菌操作，这是最主要的。自己的东西自己用，不管是培养基，还是胰酶PBS，快用完了的时候一定要提前准备，不能临到用的时候发现没有了到处借，结果出问题了也不能找到原因。
剩下的就是使用的东西的问题 ...

没养过儿子怎么办
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29楼2013-09-12 14:48:39
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普通回帖

辉辉集团

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
XI4ZHL(金币+1): 2011-09-19 14:13:48
注意处处 时时事事的无菌操作
培养液的配置
温度
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2楼2011-09-19 11:48:03
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athenawj

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
XI4ZHL(金币+1): 2011-09-19 14:13:53
dhd997(金币+2): good 2011-09-23 12:34:04
传代时将细胞吹下来，避免产生气泡
按时观察培养细胞的状态
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3楼2011-09-19 12:43:59
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
各位希望大家能够详细的说一下，自己的心得，经验，促进交流，相互学习！
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4楼2011-09-19 14:15:04
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xiaoxiangtu

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-09-19 18:39:22
XI4ZHL(金币+1): 2011-09-21 07:39:29
最重要的就是要注意无菌操作了。手套，试剂瓶，工作台都要注意灭菌。常观察细胞状态。最初养细胞的时候，状态很好，后面状态不太好了，还没找出具体原因。
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5楼2011-09-19 14:27:15
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yejian

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-09-19 18:39:29
XI4ZHL(金币+1): 2011-09-21 07:39:35
我个人的经验是自己养细胞的东西自己用，千万别污染，万事小心，每次进细胞室当做自己做感受态一样，每次拿出操作台再拿进去时一定喷酒精
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6楼2011-09-19 18:20:13
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zlu520

至尊木虫 (职业作家)
XI4ZHL(金币+1): 2011-09-21 07:39:40
学习了！
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7楼2011-09-19 18:30:08
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
欢迎大家继续交流！
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8楼2011-09-20 08:09:50
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
wanhscn(金币+3): Good！ 2011-09-24 08:42:17
引用回帖:
10楼: Originally posted by l-c-l at 2011-09-22 23:22:44:
最要命的是碰到细胞怎么样都半死不活的，老化严重。可以亚克隆。 天气热了小心黑胶虫，过滤没用的[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
[ Last edited by l-c-l on 2011-9-22 a ...

国外是没有黑胶虫这一说的，很多时候我们认为是因为黑胶虫导致了细胞状态不好，其实相反是因为细胞状态不好导致了黑胶虫，黑胶虫其实是细胞死亡的一些残留物。如碰到这种问题，看是不是其他原因造成的。
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11楼2011-09-23 08:19:55
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by l-c-l at 2011-09-22 23:22:44:
最要命的是碰到细胞怎么样都半死不活的，老化严重。可以亚克隆。 天气热了小心黑胶虫，过滤没用的[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
[ Last edited by l-c-l on 2011-9-22 a ...

谢谢参与
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12楼2011-09-23 08:25:21
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
谢谢各位的参与，多谢分享经验，希望各位有经验的虫友继续给大家带来丰富经验，没做过的吸取经验！
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14楼2011-09-24 08:18:47
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busintramp

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
养细胞。。。动物还植物细胞呀~这两差异还大的很~！不过注意：无菌，培养基营养，pH值都还是相似的~！
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15楼2011-09-24 08:25:06
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athenawj

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by l-c-l at 2011-09-22 23:22:44:
最要命的是碰到细胞怎么样都半死不活的，老化严重。可以亚克隆。 天气热了小心黑胶虫，过滤没用的[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
[ Last edited by l-c-l on 2011-9-22 a ...

黑胶虫我们也碰到过，选择的血清有问题，换了就没这种情况了，或者加四环素
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16楼2011-09-24 10:11:13
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wwddjj

木虫 (小有名气)
学习了
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17楼2011-09-24 11:38:59
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花花贝

金虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我每次进去用掉一副手套，从来不重复用，结果产生了一堆只用了一次的乳胶手套
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18楼2011-09-24 12:15:30
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XI4ZHL

铜虫 (著名写手)
学习了，大家继续努力，相互交流！
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19楼2011-09-25 08:25:26
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by 花花贝 at 2011-09-24 12:15:30:
我每次进去用掉一副手套，从来不重复用，结果产生了一堆只用了一次的乳胶手套

可以拿出来在外面做分子实验啊，呵呵！
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20楼2011-09-26 11:13:31
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angie8610

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
养了半年没有成果，很是伤心呀，还得继续。。。。
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21楼2012-02-12 14:40:48
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airbus320

禁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励新虫 2012-02-12 23:59:06
本帖内容被屏蔽
22楼2012-02-12 22:27:02
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sgy0608

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
只要培养基颜色正常就不要频繁换液。
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23楼2012-02-14 16:17:54
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dandan123456

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
各位高手们，我听说如果在细胞室做实验，还要有考试，请问有知道细胞室需要考的内容吗？
还请不吝赐教。吾将万分感激！！
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26楼2012-09-12 10:50:39
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潘攀aa

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
21楼: Originally posted by angie8610 at 2012-02-12 14:40:48
养了半年没有成果，很是伤心呀，还得继续。。。。

我也是啊啊啊 很是心痛。我养的细胞不贴壁，你知道什么东西利于贴壁吗
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28楼2013-06-02 16:02:06
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lgj596231

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
27楼: Originally posted by 独醉 at 2012-09-21 17:21:38
为什么开始养的时候很好，后来就不行了啊?

我也是啊
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30楼2013-10-23 20:50:07
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gyfwxy823

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by 花花贝 at 2011-09-24 12:15:30
我每次进去用掉一副手套，从来不重复用，结果产生了一堆只用了一次的乳胶手套

可以重复利用的，喷洒酒精就可以，可以用三四次，再换新的；我们操作一般都是替换掉的手套，留着准备刷瓶子用
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31楼2015-01-19 21:07:48
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feishao03109楼
2011-09-22 15:57   回复  
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