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养细胞的技术，心得
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| 各位大虾希望你们能够把在养细胞中遇到的问题，得出的经验分享给大家和我，小弟不胜感激！ |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+5, MolEPI+1): 很热心，破格鼓励 2011-09-23 12:34:53
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dhd997(金币+5, MolEPI+1): 很热心，破格鼓励 2011-09-23 12:34:53
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养了一年的细胞，不过都是养传代细胞，没试过自己做原代细胞培养。只是一些简单的实验，不涉及细胞药物处理及转染亚克隆之类的。说说自己的心得，仅供参考。 1. 每养一种细胞之前，都请教养过的人或上网搜一下相关的资料，了解一下这个细胞的培养条件及注意事项。丁香园在这方面的信息是要比小木虫要多的。 2. 注意每一步的操作都防污染。有人说打开盖上瓶口都在酒精灯上烧其实不好因为影响pH值，但我觉得还是很有必要的，培养基放进培养箱后pH会改变的，个人觉得影响不大。东西拿进生物安全柜都要喷酒精擦干，手也常喷酒精。不要在防污染这方面存在侥幸心理觉得这次没事下次也继续，我就试过，惨痛的经历让我连续加了一个月班的实验结果付诸东流。 3. 消化时间不要过长，观察细胞形状变圆还贴在皿底就可以了。把胰酶吸掉再加培养基吹打会比较好。 4. 每种细胞的消化时间有所不同，这个要自己去总结经验。同事教我用PBS把胰酶稀释一倍，这样比较好把握消化的时间。 5. 论坛上很多人分享经验说吹打十多次，但我每次都要吹很多次才能吹匀，不知何解。气泡也不能避免，后来就把气泡吸走或直接把培养液吸到新的培养皿里。 6. 好多知识或注意事项都是上网搜的，多上论坛好处多。 |
13楼2011-09-23 12:14:41
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-23 12:34:28
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dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-23 12:34:28
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最要命的是碰到细胞怎么样都半死不活的，老化严重。可以亚克隆。 天气热了小心黑胶虫，过滤没用的[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] [ Last edited by l-c-l on 2011-9-22 at 23:23 ] |
10楼2011-09-22 23:22:44
24楼2012-02-14 17:08:22
25楼2012-02-14 18:00:42
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西瓜(金币+3): 鼓励新虫 2012-02-12 23:59:06
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我也是啊 30楼2013-10-23 20:50:07
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