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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » 蛋白酶K处理异常
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zmlustc

铁虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白酶K处理异常 已有1人参与

ChIP试验中，为啥加入酚/氯仿/异丙醇提取DNA时，静置分层很慢，而且13200rpm*15min后上层水相呈乳白色浑浊呢？我觉得蛋白酶K消化有问题，但是不知道那一步不正确，请各位帮我看看哇！
步骤：加入Elution Buffer（170ddH2O+10ul20%SDS+20ul%NaHCO3=200ul)洗脱beads后，先加入8ul 5M NaCl 65摄氏度解交联6h，再加入4ul0.5ulEDTA+8ulTris-HCl+1ul Proteinase K，45摄氏度处理2h 。之后就加入酚/氯仿/异丙醇了。蛋白酶K是用10mg粉末加入到50mM Tris-HCl，10mMCaCl2的缓冲液（1ml）中配置的，浓度是10mg/ml。
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1楼 2014-08-11 12:49:46
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猪妹妹May

铁虫 (初入文坛)
您好，请问楼主后来实验结果如何，有跑电泳看一下超声和纯化结果吗，发现原因了吗？
我最近在做chip，感觉也遇到解交联和消化的问题，想请教您。
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2楼2020-05-30 03:56:03
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