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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNAse A 配制煮沸问题
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变心的翅膀

木虫 (小有名气)

[求助] RNAse A 配制煮沸问题已有4人参与

请教各位虫友在配RNA酶的时候母液煮沸是否会变浑浊？
我们配的时候每次一煮就会变混，不知道各位是不是也这样？
不煮又怕DNase把DNA给切了。
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男儿当自强
1楼2013-12-18 13:50:26
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-18 17:30:38
根据不同的商品，有些是要煮的，有些是不煮的。没有发生过浑浊现象。
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2楼2013-12-18 17:02:48
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天猫天猫

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-18 17:30:44
如果买的是DNase free的RNase就不用煮，否则就要煮。煮也是用沸水浴煮，不是直接用电加热器煮，呵呵
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3楼2013-12-18 17:09:05
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变心的翅膀

木虫 (小有名气)
又试了一下，之前用tris-hcl和N?aCl配的，沸水煮15分钟，变浑浊了。这次直接用水配的，100度水浴15分钟，没有发生浑浊，下次直接用水吧。看了一下说明说是中性条件下浓度高时，核糖核酸酶可能会发生沉淀，所以导致浑浊，不知道是不是这个原因。总之这次还算顺利。谢谢各位的热心回复。
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男儿当自强
4楼2013-12-19 14:16:59
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lqbzfun

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这么久了，估计楼主都弃楼了。不过还是说下，以便后来人吧。
RNase母液浓度可配到100mg/mL，可用 50mM Tris （pH7.4）+50%甘油溶解，煮沸15min，缓慢冷却至室温后，放置于-20℃冷藏。
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5楼2015-06-23 16:02:49
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pqq226

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lqbzfun at 2015-06-23 16:02:49
这么久了，估计楼主都弃楼了。不过还是说下，以便后来人吧。
RNase母液浓度可配到100mg/mL，可用 50mM Tris （pH7.4）+50%甘油溶解，煮沸15min，缓慢冷却至室温后，放置于-20℃冷藏。

你好，我的RNase A是溶液浓度为100mg/mL，要配成20mg/mL，直接用去离子水可以嘛？
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开心最重要
6楼2015-06-24 15:20:20
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变心的翅膀

木虫 (小有名气)
你之前的100的是什么配制的？我觉得最好还是用同样的溶液
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男儿当自强
7楼2015-06-25 07:50:55
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖



还以为煮RNase灭活DNase已经成了传说。。。

现在DNase free RNase不是很便宜么？Qiagen质粒抽提试剂盒里面配的100mg/mL的很好。
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8楼2015-06-25 10:09:27
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