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铁虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白酶K处理异常 已有1人参与

ChIP试验中,为啥加入酚/氯仿/异丙醇提取DNA时,静置分层很慢,而且13200rpm*15min后上层水相呈乳白色浑浊呢?我觉得蛋白酶K消化有问题,但是不知道那一步不正确,请各位帮我看看哇!
步骤:加入Elution Buffer(170ddH2O+10ul20%SDS+20ul%NaHCO3=200ul)洗脱beads后,先加入8ul 5M NaCl 65摄氏度解交联6h,再加入4ul0.5ulEDTA+8ulTris-HCl+1ul Proteinase K,45摄氏度处理2h 。之后就加入酚/氯仿/异丙醇了。蛋白酶K是用10mg粉末加入到50mM Tris-HCl,10mMCaCl2的缓冲液(1ml)中配置的,浓度是10mg/ml。
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猪妹妹May

铁虫 (初入文坛)

您好,请问楼主后来实验结果如何,有跑电泳看一下超声和纯化结果吗,发现原因了吗?
我最近在做chip,感觉也遇到解交联和消化的问题,想请教您。
2楼2020-05-30 03:56:03
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