| 查看: 2310 | 回复: 6 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
lybio金虫 (正式写手)
|
[求助]
终止密码子附近序列是否有优化问题 已有3人参与
|
||||
|
大家好！请教个问题。 前期插入载体片段的终止密码子发生突变，未及时查出，进行表达，表达量挺高的（载体本身有终止密码子，C端比目标蛋白多出10来个氨基酸，纯化出的蛋白活性较标准品低了一个数量级）。现将突变了的终止密码子突变正常，而后连接与之前相同的表达载体，发现蛋白不表达了（重复做了多次，都是此结果）。请问各位大侠这是因什么原因造成的？ 查了些资料，有说“翻译终止是蛋白生产必须的一步，更有效的翻译终止导致更好的蛋白表达。如果终止密码子附近序列没有最佳化，可能发生明显增加的翻译通读，因此减少了蛋白表达”。如果是因终止密码子附近序列造成，又应该如何优化呢？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 分子生物学相关 | 蛋白表达纯化鉴定精华 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有170人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 不同载体上的GFP序列是否一样
已经有13人回复
- 获得一段碱基序列，应该是个未知基因，如何确定起始密码子和终止密码子
已经有3人回复
- 关于基因异源表达
已经有4人回复
- 如何确定密码子从序列第几位开始？
已经有3人回复
- 蛋白表达不出来是怎么回事？
已经有12人回复
- 关于稀有密码子的优化，请求大家指教
已经有16人回复
- 求优化密码子软件或网站
已经有8人回复
- 关于密码子偏好性问题、密码子优化问题~~
已经有5人回复
- 生物信息学专题－生物版，医学版和信息科学版共同创建
已经有87人回复
5楼2014-08-08 13:16:17
songzuowei
木虫 (著名写手)
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 2666.2
- 散金: 18
- 红花: 7
- 帖子: 2058
- 在线: 98.5小时
- 虫号: 2469387
- 注册: 2013-05-17
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2014-08-08 10:29:11
kuaile5420
专家顾问 (著名写手)
- 应助: 72 (初中生)
- 贵宾: 0.232
- 金币: 10316.4
- 散金: 124
- 红花: 15
- 帖子: 1071
- 在线: 224.5小时
- 虫号: 1836826
- 注册: 2012-05-27
- 性别: GG
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
- 管辖: 生物医药区
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-08 13:45:07
lybio: 金币+5, ★★★很有帮助, 准备弄条下游引物试试 2014-08-11 08:24:17
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-08 13:45:07
lybio: 金币+5, ★★★很有帮助, 准备弄条下游引物试试 2014-08-11 08:24:17
|
绝大多数生物都有偏爱的围绕终止密码子的序列框架。酵母和哺乳动物偏爱的终止密码子分别是UAA和UGA。单子叶植物最常利用UGA，而昆虫和大肠杆菌倾向于用UAA。翻译终止效率可能受紧接着终止密码子的下游碱基和紧靠终止密码子的上游序列影响。在酵母中通过改变围绕终止密码子的局部序列框架，翻译终止效率可能被减低几个100倍。对于UGA和UAA，紧接着终止密码子的下游碱基对有效终止的影响力大小次序为G>U，A>C；对于UAG是U、A>C>G。 对于大肠杆菌，翻译终止效率可因终止密码子及临近的下游碱基的不同而显著不同，从80%（UAAU）到7%（UGAC）。对于UAAN和UAGN系列，终止密码子下游碱基对翻译的有效终止的影响力大小次序为U>G>A、C。UAG极少被大肠杆菌利用，相比UAAN和UGAN，UAG表现了有效的终止，但其后的碱基对有效终止的影响力为G>U，A>C。对于哺乳动物，偏爱的终止密码子为UGA，其后的碱基可以对in vivo翻译终止有8倍的影响（A、G>>C、U）。对于UAAN系列，in vivo终止效率可以有70倍的差别，UGAN系列为8倍。如果终止密码子附近序列没有最佳化，可能发生明显增加的翻译通读，因此减少了蛋白表达。例如，在兔网状细胞无细胞翻译系统里，UGAC的翻译通读可以高达10%，而第四个碱基如果为A，G或C，翻译通读为<1%。 摘自http://www.bioon.com/experiment/nob2/86115.shtml。不知道对您是否有帮助？ |
3楼2014-08-08 11:29:06
4楼2014-08-08 11:35:24
28