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xmin828金虫 (正式写手)
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关于高效液相色谱几个问题 已有3人参与
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1. 我们分离分析物质时，首选柱肯定是C18柱，我在网上看到这么一个说法，说如果一个物质在水中和正辛醇中分配系数差异较大就可以考虑使用ODS柱，那么这个差异要大到什么程度就可以认为足够了呢？举个例子，如果我的这个待测物在水中的溶解度可以达到20mg/ml，在正辛醇中仅有0.1mg/ml，是否就可以考虑使用C18柱呢？ 2.流动相中盐的加入可以改善峰形，但是盐的加入对柱子肯定是有损害的，那么多大浓度我们认为就算高浓度盐呢？20mM？25mM? 3.查阅文献时，我们看到分析某些物质时有的加有buffer的水相经常需要调pH，这个pH的选择有什么依据么？ 4.水相中如果含有0.1%的TFA，因为TFA也是有机物，可以直接用ACN洗脱么，还是必须要先10%有机相冲，再用纯有机相保存？ 5.我看到有些人待分析物结构含有7个羟基，个人觉得已经算是非常高极性的物质，可是还是用C18柱分析，我手头有个核苷类似物，只含有两个羟基，老师还是建议我直接略过C18柱，换用CN柱等来分析，想问下C18柱分析极性化合物有什么具体的经验么 每个问题5个金币，不一定每个问题都要能答出来，只要能帮我解决一星半点疑惑就会发金币，先谢谢大家！ |
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赈早见琥珀主
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2楼2014-07-27 17:38:03
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xmin828: 金币+4, ★有帮助, 谢谢！ 2014-07-28 10:06:55
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1、之所以大部分用C18，就是大部分物质都可以有所保留，但是极性特别大的物质出峰太靠前，如果你样品纯没关系；但如果你样品有杂质，就无法达到分离的效果（很可能在死时间附近出峰）；极性特别小的物质，出峰非常靠后，甚至可能1、2个小时才能洗脱下来，这个时候就选择一些相似键和的柱子或者正相体系，使其出峰提前。 4、三氟乙酸也可以溶于有机相，但是都是建议要大比例的水冲洗先；或者是直接同样有机相/水相比例，水相使用纯水开始冲洗梯度 5、我觉得你太纠结什么物质用C18，什么时候用别的柱子，其实这是方法开发的一部分，大致的判断后还需要筛选柱子的分离的。关键是你要测的物质是否可以和样品中其他物质分开。你可以用C18柱、可以用有极性键和的柱子（就是固定相对于化合物的保留能力不同），或许都能出峰，就是看能不能满足你的分离需要了。 |
3楼2014-07-28 09:18:35
4楼2014-08-05 15:23:44
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