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蜡笔晓寒

新虫 (初入文坛)

[求助] 聚丙烯酰胺凝胶电泳的几个问题,急求!!! 已有5人参与

本来刚刚接触分子生物的相关实验,最近老板安排跑微卫星引物的通用性,从相关文献上获得了凝胶的配方及电泳步骤,但是做起实验来却遇到了像许多困难,急求大神帮忙!
1.凝胶后往加样孔加样经常出现扩散现象,本人尝试过3次不同的pcr产物结果都是如此,凝胶时间为70分钟,问题是不是出在缓冲液上?
2.起胶的时候出现断裂现象,胶很脆。
以上两种现象会不会与配置TBE时的EDTA质量有关,EDTA溶液是去年配制的,经询问说是可以使用。
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幺哥撸啊撸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
蜡笔晓寒(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-27 09:34:30
你的MARKER清楚么,不清楚就是胶版没做好。清楚的话就是模板或TAG酶不行,用新的试试吧
4楼2014-07-27 08:55:39
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Titanic416

银虫 (知名作家)

北京方便面真方便

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蜡笔晓寒(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-27 09:27:05
这个还没有遇到过呢,ssr时,出现胶脱落的现象,后来发现是染色的时候,在氢氧化钠中泡久了,后来就没出现过,你预电泳了没有,点样太慢了吗,缓冲液换下试试。七十分钟应该够了的。胶断了,肯定是配的有问题。这个你在好好查查,摸清条件是关键呀。修复

[ 发自小木虫客户端 ]
阳光总在风雨后,请相信有彩虹!
2楼2014-07-27 00:12:43
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蜡笔晓寒

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Titanic416 at 2014-07-27 00:12:43
这个还没有遇到过呢,ssr时,出现胶脱落的现象,后来发现是染色的时候,在氢氧化钠中泡久了,后来就没出现过,你预电泳了没有,点样太慢了吗,缓冲液换下试试。七十分钟应该够了的。胶断了,肯定是配的有问题。这个 ...

恩  今天我再试一下 我把TBE重新配了
3楼2014-07-27 08:52:07
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-28 08:43:14
电泳液出了问题可能是你那种情况,温度也是一个影响因素,很多了,能具体叙述的问题吗?
5楼2014-07-27 20:12:50
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