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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 聚丙烯酰胺凝胶电泳的几个问题，急求！！！
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蜡笔晓寒

新虫 (初入文坛)

[求助] 聚丙烯酰胺凝胶电泳的几个问题，急求！！！ 已有5人参与

本来刚刚接触分子生物的相关实验，最近老板安排跑微卫星引物的通用性，从相关文献上获得了凝胶的配方及电泳步骤，但是做起实验来却遇到了像许多困难，急求大神帮忙！
1.凝胶后往加样孔加样经常出现扩散现象,本人尝试过3次不同的pcr产物结果都是如此，凝胶时间为70分钟，问题是不是出在缓冲液上?
2.起胶的时候出现断裂现象，胶很脆。
以上两种现象会不会与配置TBE时的EDTA质量有关，EDTA溶液是去年配制的，经询问说是可以使用。
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1楼 2014-07-26 23:46:23
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Titanic416

银虫 (知名作家)

北京方便面真方便

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蜡笔晓寒(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-27 09:27:05
这个还没有遇到过呢，ssr时，出现胶脱落的现象，后来发现是染色的时候，在氢氧化钠中泡久了，后来就没出现过，你预电泳了没有，点样太慢了吗，缓冲液换下试试。七十分钟应该够了的。胶断了，肯定是配的有问题。这个你在好好查查，摸清条件是关键呀。修复

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阳光总在风雨后，请相信有彩虹！
2楼2014-07-27 00:12:43
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蜡笔晓寒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Titanic416 at 2014-07-27 00:12:43
这个还没有遇到过呢，ssr时，出现胶脱落的现象，后来发现是染色的时候，在氢氧化钠中泡久了，后来就没出现过，你预电泳了没有，点样太慢了吗，缓冲液换下试试。七十分钟应该够了的。胶断了，肯定是配的有问题。这个 ...

恩  今天我再试一下 我把TBE重新配了
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3楼2014-07-27 08:52:07
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幺哥撸啊撸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
蜡笔晓寒(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-27 09:34:30
你的MARKER清楚么，不清楚就是胶版没做好。清楚的话就是模板或TAG酶不行，用新的试试吧
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4楼2014-07-27 08:55:39
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-28 08:43:14
电泳液出了问题可能是你那种情况，温度也是一个影响因素，很多了，能具体叙述的问题吗？
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5楼2014-07-27 20:12:50
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蜡笔晓寒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 幺哥撸啊撸 at 2014-07-27 08:55:39
你的MARKER清楚么，不清楚就是胶版没做好。清楚的话就是模板或TAG酶不行，用新的试试吧

已找到原因  谢谢
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6楼2014-07-28 14:59:53
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蜡笔晓寒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by forrestgump at 2014-07-27 20:12:50
电泳液出了问题可能是你那种情况，温度也是一个影响因素，很多了，能具体叙述的问题吗？

已找到原因，我的TBE出了问题，你说的温度我也遇到过不过现在已经解决了 ，谢谢
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7楼2014-07-28 15:00:55
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华胥调

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能是TEMED加多了。

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8楼2014-07-28 16:11:02
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Ranen516

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-21 16:03:48
我们用这个胶跑蛋白！胶脆的应该是配的问题！我们10%、8%的是挺有弹性的！
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9楼2014-07-29 11:00:24
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