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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 基因测序后blast不是100%还能继续表达蛋白吗？
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wlc0206

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因测序后blast不是100%还能继续表达蛋白吗？ 已有2人参与

各位大神，如题。最近在做原核表达载体的构建，菌落pcr后送去测序了，但测回来的序列只有99%的吻合度，有一个碱基发生了错义突变，最后翻译过来有一个氨基酸发生了突变，我还能继续做下去吗？有什么软件可以分析氨基酸序列的，我后面主要是想得到蛋白然后制备多克隆抗体。谢谢
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1楼 2014-07-26 22:22:22
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
应该不能吧

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-07-26 22:51:48
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usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wlc0206(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-27 09:37:12
你可以找他们要一下原始数据，看看那个碱基的突变是因为真的突变了还是只是因为测序信号不是很清晰而导致的。如果的确是真真切切的突变，最好还是能够重新做。或者你有方法可以鉴定蛋白的活性，如果活性没有问题，应该可以使用。只不过风险性需要你自己预估。
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下次再见面的时候，我们一定会笑着相遇吧
3楼2014-07-27 00:04:16
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wlc0206(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-27 09:37:23
1.你是拿到的重组原核表达质粒的转化子送去测序的吗？你扩增基因用的模板是哪个材料？基因组，载体？如果是以载体为模板以前测过序吗？
2.你的整个基因序列只有这一个突变位点，而且就这一个就改变氨基酸序列了吗？如果是这样那很有可能就是你PCR过程中引入的。
3.只要确定是PCR引入的而不是模板自身的问题，还是从新来吧，用这一批蛋白万一后面的抗体制备不顺利的话就说不清楚了。
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大家相互帮助哈
4楼2014-07-27 03:58:45
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杨仔

铁虫 (初入文坛)
是要对应看一下测序峰图，真是错义突变最好改过来
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5楼2014-07-30 17:33:47
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