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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 求解决测定尿酶活性时遇到的问题！！！谢谢
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夜穹下的月

铁虫 (小有名气)

[求助] 求解决测定尿酶活性时遇到的问题！！！谢谢 已有1人参与

使用比色法测定土壤尿酶活性，计算式子如下：

土壤脲酶活性以每1g土壤中NH3－N的毫克数表示。
Ure＝（X样品－X无土－X无基质）*V*n /m
式中：Ure －土壤脲酶活性值
        X样品――样品实验的光密度值在标准曲线上对应的NH3－N浓度 (mgNH3－N/ml)
        X无土――无土对照实验中的光密度值在标准曲线上对应的NH3－N浓度(mgNH3－N/ml)
        X无基质――无基质对照实验中的光密度值在标准曲线上对应的NH3－N浓度(mgNH3－N/ml)
        V ――显色液体积（此为50mL）
        n ――分取倍数（此为30/3）
        m ――烘干土重（g）（鲜土要根据水分系数换算）
请问前辈：
   1、所谓的烘干土重是指风干后的土样进行烘干后的重量吗？还是其他，请指明，谢谢
   2、要是使用新鲜土壤做实验，其水分系数如何计算，是指土壤水分吗？
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1楼 2014-07-26 11:32:09
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夜穹下的月

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by HarveyWang at 2014-08-02 14:28:54
1. 将某新鲜土样在 50 mL干净离心管内充分混匀。

2. 取 三份 各1000 mg，置于已经烘干的玻璃纤维膜上，在100℃左右烘干12-24 hr 至恒重。测定水份含量百分数。

3. 取其中1份 1000 mg 新鲜土样，用适当体积缓冲 ...

那请问：
1、上面第三点中写的是取烘干后的新鲜土进行测定，但烘干温度为100℃，这样不就失活了吗
2、要是土样已经风干了，可不可以用风干的土样进行烘干，计算烘干前后的差值作为水分系数？

麻烦解读，谢谢！
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3楼2014-08-05 09:37:27
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

1. 将某新鲜土样在 50 mL干净离心管内充分混匀。

2. 取 三份 各1000 mg，置于已经烘干的玻璃纤维膜上，在100℃左右烘干12-24 hr 至恒重。测定水份含量百分数。

3. 取其中1份 1000 mg 新鲜土样，用适当体积缓冲液稀释混匀，按要求测定其上清液中的酶活。并换算出 1 000 mg新鲜土样的酶活总量。

4. 酶活必须用 酶活总量/土样干重 来衡量。 因为不同的土样，含水量差别太大。不可用湿重衡量。
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夜穹下的月
【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2014-08-02 14:28:54
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 夜穹下的月 at 2014-08-05 09:37:27
那请问：
1、上面第三点中写的是取烘干后的新鲜土进行测定，但烘干温度为100℃，这样不就失活了吗
2、要是土样已经风干了，可不可以用风干的土样进行烘干，计算烘干前后的差值作为水分系数？

麻烦解读，谢谢！...

3.中取的是1.中的新鲜土样，而不是烘干土样。

2.中取三份烘干，为的是计算平均值。

你取得土样越干，酶活就越低，很多时候测不到！

你取土样干吗用？

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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
4楼2014-08-05 10:45:31
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夜穹下的月

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by HarveyWang at 2014-08-05 10:45:31
3.中取的是1.中的新鲜土样，而不是烘干土样。

2.中取三份烘干，为的是计算平均值。

你取得土样越干，酶活就越低，很多时候测不到！

你取土样干吗用？
...

计算尿酶的活性要用到烘干土重（上述公式中的m），所以我想测下土壤的含水量

还要请问一个问题：
实验过程有一个步骤如下：
培养结束后，用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度（甲苯应浮在刻度以上），仔细摇荡，并将悬液用致密滤纸（慢速定量滤纸）过滤于三角瓶中。
这个过程的稀释应该是粗略的，不要精确  对吗？
还是与后面的计算有关，要精细操作？
请教原理，谢谢！
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5楼2014-08-07 16:24:00
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