| 查看: 1456 | 回复: 5 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
lantianjesus新虫 (小有名气)
|
[交流]
请教大家几个层析吸附过程中缓冲液配置的问题？ 已有1人参与
|
||
|
刚开始接触层析纯化，许多基础问题都不太懂，见谅啊，想请教下大家： 1. 吸附蛋白质时，PB缓冲液浓度一般采用0.1M还是0.01M呢，许多文献相同蛋白质吸附但选择PB浓度却不一样，为什么？ 2. 1.5M的Nacl洗脱液是指Nacl在PB溶液里的浓度吗？是指Nacl+PB缓冲液？还是指Nacl水溶液+PB缓冲液？加入以Nacl为溶质，以PB作为溶剂吧？配方？ 3. 做BSA蛋白标准曲线时，有一种是按照不同浓度配BSA溶液，另一种先配置1mg/ml蛋白质溶液，然后通过稀释成不同浓度，我发现两种方法做出来的标准曲线都呈指数形式，线性拟合只能在97%，如何解决？ 4. 研究不同ph值条件，就需要选择不同范围的缓冲液，那如果不同缓冲液浓度不一致会不会对结果有影响呢？缓冲液浓度的大小有什么作用或者意义呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有8人回复
-
国自然评审意见
已经有17人回复
-
我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急
已经有6人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有18人回复
-
2026年叶企孙基金
已经有7人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有4人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有13人回复
-
国自然面上复盘~欢迎讨论
已经有14人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大孔树脂柱动态吸附试验的问题
已经有5人回复
- 硅胶柱层析梯度洗脱来分离某种物质时，要用什么仪器啊
已经有8人回复
- 有没有人做过氧化铝吸附的，求助！
已经有14人回复
- 羰基还原酶上DEAEsepharose柱后测酶活、比活力都明显降低，不知道什么原因
已经有5人回复
- HIC层析缓冲液pH对分离的影响
已经有3人回复
- 柱层析吸附剂的问题
已经有6人回复
- DEAE FAST FLOW使用有关问题
已经有7人回复
- 【求助】关于柱层析洗脱
已经有9人回复
- 【求助】原吸 干法灰化测定相关问题？？
已经有5人回复
- 【求助】25金币求助：氧化铝作为吸附剂的柱层析问题
已经有19人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化后透析及浓缩问题
已经有8人回复
- 【资源】高效液相色谱仪操作三要点
已经有76人回复
- 【求助/交流】硫酸铵分级沉淀
已经有13人回复
lantianjesus
新虫 (小有名气)
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 313.5
- 散金: 64
- 红花: 9
- 帖子: 179
- 在线: 101.4小时
- 虫号: 1096759
- 注册: 2010-09-12
- 专业: 聚合物共混与复合材料
4楼2014-07-17 10:20:14
lantianjesus
新虫 (小有名气)
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 313.5
- 散金: 64
- 红花: 9
- 帖子: 179
- 在线: 101.4小时
- 虫号: 1096759
- 注册: 2010-09-12
- 专业: 聚合物共混与复合材料
2楼2014-07-16 15:03:27
wolfman840
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 225 (大学生)
- 金币: 3524.8
- 散金: 20
- 红花: 12
- 帖子: 702
- 在线: 63.2小时
- 虫号: 902627
- 注册: 2009-11-14
- 性别: GG
- 专业: 生物技术药物
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
1.PB缓冲液看你的需求，一般0.1M的电导基线比较高，做离子交换什么的就不要用了。0.01~0.05M的还是比较常用。但是在做一些特殊试验，比如亲和，分子筛时，0.1M的又成常用的了。 2.1.5M指的是在你的洗脱液中含有1.5mol/ml的NaCl，至于溶剂是什么，你用的是PB洗脱就是PB，用水就是水，用柠檬酸就是柠檬酸，还是那句话，看你的层析类型和需求。 3.你可以采用浓配后稀释的方法来进行配制，比较准确，多配几回吧，这个是熟练才会好的。记得BSA要保护好，别污染了。线性在97%其实也可以用了。 4.缓冲液浓度大小对于蛋白来说主要是增强其离子效应和水化效应。并且起到等渗保护的作用，对于层析来说，不同的PH有不同的配方，需要你自己查阅。不同浓度的缓冲液，对于层析的影响是不一样的。在做层析时要特别注意。 |
3楼2014-07-16 17:19:46
lantianjesus
新虫 (小有名气)
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 313.5
- 散金: 64
- 红花: 9
- 帖子: 179
- 在线: 101.4小时
- 虫号: 1096759
- 注册: 2010-09-12
- 专业: 聚合物共混与复合材料
5楼2014-07-17 11:07:13
投票:
10