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lantianjesus新虫 (小有名气)
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[交流]
请教大家几个层析吸附过程中缓冲液配置的问题？ 已有1人参与
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刚开始接触层析纯化，许多基础问题都不太懂，见谅啊，想请教下大家： 1. 吸附蛋白质时，PB缓冲液浓度一般采用0.1M还是0.01M呢，许多文献相同蛋白质吸附但选择PB浓度却不一样，为什么？ 2. 1.5M的Nacl洗脱液是指Nacl在PB溶液里的浓度吗？是指Nacl+PB缓冲液？还是指Nacl水溶液+PB缓冲液？加入以Nacl为溶质，以PB作为溶剂吧？配方？ 3. 做BSA蛋白标准曲线时，有一种是按照不同浓度配BSA溶液，另一种先配置1mg/ml蛋白质溶液，然后通过稀释成不同浓度，我发现两种方法做出来的标准曲线都呈指数形式，线性拟合只能在97%，如何解决？ 4. 研究不同ph值条件，就需要选择不同范围的缓冲液，那如果不同缓冲液浓度不一致会不会对结果有影响呢？缓冲液浓度的大小有什么作用或者意义呢？ |
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wolfman840
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1.PB缓冲液看你的需求，一般0.1M的电导基线比较高，做离子交换什么的就不要用了。0.01~0.05M的还是比较常用。但是在做一些特殊试验，比如亲和，分子筛时，0.1M的又成常用的了。 2.1.5M指的是在你的洗脱液中含有1.5mol/ml的NaCl，至于溶剂是什么，你用的是PB洗脱就是PB，用水就是水，用柠檬酸就是柠檬酸，还是那句话，看你的层析类型和需求。 3.你可以采用浓配后稀释的方法来进行配制，比较准确，多配几回吧，这个是熟练才会好的。记得BSA要保护好，别污染了。线性在97%其实也可以用了。 4.缓冲液浓度大小对于蛋白来说主要是增强其离子效应和水化效应。并且起到等渗保护的作用，对于层析来说，不同的PH有不同的配方，需要你自己查阅。不同浓度的缓冲液，对于层析的影响是不一样的。在做层析时要特别注意。 |
3楼2014-07-16 17:19:46
lantianjesus
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30