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87115wh木虫 (小有名气)
七吃喀嚓
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[求助]
在amp平板中的菌落，37℃放久了，会不会影响活性？ 已有3人参与
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| 重组质粒转化入DH5α后，涂amp的板子，挑取了单菌落，通过pcr以及双酶切鉴定发现是假阳性，之后在37℃放了3天后又挑取了单菌落，但是在加了amp的LB液体中基本没长，连续挑取了好几次都没长，但是第一次挑取的时候可以在LB液体中生长。请问各位，是由于在37℃放的太久，导致单克隆活性降低从而不长，还是其他原因呢？敬请赐教，越详细越好~ |
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【答案】应助回帖
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youlinglyw: 金币+3 2014-07-23 09:27:38
youlinglyw: 金币+3 2014-07-23 09:27:38
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肯定是会影响的。首先氨苄自身就会降解，温度高的时候降解速度更快。在37°放那么多天显然是不行的。 AMP抗性基因的原理是表达Β-内酰胺酶来分解菌落周围的氨苄。所以在涂板的时候菌液量也很重要，如果菌液量过大，就会导致许多假阳性菌落，因为抗性菌落会分解周围的氨苄，如果菌落密度太大，那么和抗性菌落临近的非抗性菌落也会大量繁殖，从而成为假阳性。 你培养后已经发现了假阳性就不应该继续放那么久，随着菌落越来越多，氨苄被分解的越多，假阳性也就自然增多。 建议你降低涂板量，然后37° 14h就可以了。平板取出温室后直接包裹放进4°冰箱，减缓菌落生长。如果是放在4°的话，你也可以过两天再来取单菌落，菌落会稍微变大，但是不会增加很多。 |
6楼2014-07-23 00:04:19
2楼2014-07-04 11:34:29
87115wh
木虫 (小有名气)
七吃喀嚓
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- 在线: 132.5小时
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- 注册: 2011-04-13
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
3楼2014-07-04 12:23:04
pudding9696
无虫 (小有名气)
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感谢参与，应助指数 +1
youlinglyw: 金币-10, 应助指数-1, 屏蔽内容, 违规存档, 广告 2014-07-04 15:24:18
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4楼2014-07-04 14:24:33
