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87115wh

木虫 (小有名气)

七吃喀嚓

[求助] 在amp平板中的菌落,37℃放久了,会不会影响活性? 已有3人参与

重组质粒转化入DH5α后,涂amp的板子,挑取了单菌落,通过pcr以及双酶切鉴定发现是假阳性,之后在37℃放了3天后又挑取了单菌落,但是在加了amp的LB液体中基本没长,连续挑取了好几次都没长,但是第一次挑取的时候可以在LB液体中生长。请问各位,是由于在37℃放的太久,导致单克隆活性降低从而不长,还是其他原因呢?敬请赐教,越详细越好~
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老妹,你说这是为什么呢
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zhifangli

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
youlinglyw: 金币+3, 赠人玫瑰手有余香,生物科学有你更精彩! 2014-07-04 11:36:49
87115wh: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-07-04 12:23:06
氨苄是一个很容易失活的抗生素,越高温失效越快,LZ在37°放了三天,长出来的肯定就是假阳性了。第一次长出来的还有一定比例的假阳性,何况又放了三天37度。如果,做T-easy 克隆,建议选用携带有卡纳的抗生素。
2楼2014-07-04 11:34:29
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87115wh

木虫 (小有名气)

七吃喀嚓

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhifangli at 2014-07-04 11:34:29
氨苄是一个很容易失活的抗生素,越高温失效越快,LZ在37°放了三天,长出来的肯定就是假阳性了。第一次长出来的还有一定比例的假阳性,何况又放了三天37度。如果,做T-easy 克隆,建议选用携带有卡纳的抗生素。

可能是这样,昨天又重新涂了板子挑了单克隆,今天果然长了,kankanpcr结果吧~
老妹,你说这是为什么呢
3楼2014-07-04 12:23:04
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pudding9696

无虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
youlinglyw: 金币-10, 应助指数-1, 屏蔽内容, 违规存档, 广告 2014-07-04 15:24:18
本帖内容被屏蔽

4楼2014-07-04 14:24:33
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hl5210

新虫 (初入文坛)

我好奇的是,为什么37摄氏度放了3天没有长??我会放在冰箱4摄氏度,但是还会长,只是慢一些
5楼2014-07-22 16:37:54
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usky_4

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
youlinglyw: 金币+3 2014-07-23 09:27:38
肯定是会影响的。首先氨苄自身就会降解,温度高的时候降解速度更快。在37°放那么多天显然是不行的。
AMP抗性基因的原理是表达Β-内酰胺酶来分解菌落周围的氨苄。所以在涂板的时候菌液量也很重要,如果菌液量过大,就会导致许多假阳性菌落,因为抗性菌落会分解周围的氨苄,如果菌落密度太大,那么和抗性菌落临近的非抗性菌落也会大量繁殖,从而成为假阳性。
你培养后已经发现了假阳性就不应该继续放那么久,随着菌落越来越多,氨苄被分解的越多,假阳性也就自然增多。
建议你降低涂板量,然后37° 14h就可以了。平板取出温室后直接包裹放进4°冰箱,减缓菌落生长。如果是放在4°的话,你也可以过两天再来取单菌落,菌落会稍微变大,但是不会增加很多。
下次再见面的时候,我们一定会笑着相遇吧
6楼2014-07-23 00:04:19
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