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lingkai11111

新虫 (小有名气)

[求助] 重组大肠杆菌培养的问题 已有5人参与

各位前辈好,小弟不才,愚钝异常,培养大肠杆菌中出现问题,譬如发酵六瓶(LB转接至TB培养基),有一瓶长的比较正常,另外几瓶要么长不起来一直澄清,要不先浑浊后来澄清(发酵液中有丝状悬浮物),另外有一次培养过夜后菌体都长起来了。总体说,这六瓶较以前正常情况时更粘稠,泡沫也增多,气味更难闻。怀疑是噬菌体感染,但是实验室其他同学做大肠杆菌培养都很正常,另外我用这些发酵液划线没有杂菌,也没出现噬菌斑;之前怀疑菌种老化,但是活化菌种多次,每次都出现相同情况;也想过是培养基优化后C:N变化导致,但是用以前的培养基培养照样出现相同情况!不知道是什么原因,请各位高手不吝指教,小弟感谢不尽。。。
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhang8826857: 金币+3, 你懂的O(∩_∩)O 2014-05-19 10:45:35
如果是相同菌种接种的,同时出现了正常和异常的发酵瓶,说明菌种应该是没问题,问题只能是培养基或培养条件。菌种有问题不会出现正常发酵瓶。
接种量在延迟期差异表现比较明显,接种量少的前期一直长不起来。一般按8%左右接种都是没问题的。
种子培养基一般是LB,这个培养基上都长不出来?看看你的菌是否带抗性,再看下你加的抗生素对不对,大肠杆菌在LB上很好长出来啊。或者菌有问题了,换菌种。

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4楼2014-05-19 09:00:42
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普通回帖

laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感觉像是染菌,六瓶培养基是平行的吗?个别瓶子染菌见过,还没见过每次都是这么染菌的。
2楼2014-05-18 21:02:32
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lingkai11111

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by laozuzunzhe at 2014-05-18 21:02:32
感觉像是染菌,六瓶培养基是平行的吗?个别瓶子染菌见过,还没见过每次都是这么染菌的。

这次是接种量不一样,不过以前平行的也是这种情况。。。昨天种子培养基都没长起来啊。。。是不是菌种活化的问题?
3楼2014-05-19 08:30:07
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lingkai11111

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by laozuzunzhe at 2014-05-19 09:00:42
如果是相同菌种接种的,同时出现了正常和异常的发酵瓶,说明菌种应该是没问题,问题只能是培养基或培养条件。菌种有问题不会出现正常发酵瓶。
接种量在延迟期差异表现比较明显,接种量少的前期一直长不起来。一般按 ...

种子培养基培养十个小时还是澄清的,里面有好多丝状物!两个小时后去看,变混浊了!气泡比较多,感觉较粘稠!

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-05-19 12:14:02
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by lingkai11111 at 2014-05-19 12:14:02
种子培养基培养十个小时还是澄清的,里面有好多丝状物!两个小时后去看,变混浊了!气泡比较多,感觉较粘稠!
...

有气泡粘稠可能是杂菌,大肠杆菌不至于长10h,大肠的传代是很快的。
给环境、瓶子等这些实验器材都做一次灭菌吧,另外,验证下你的菌种好着没有。
6楼2014-05-19 15:18:40
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战斗节能

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
染噬菌体了!非常确定你这个的可能性 。

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7楼2014-05-19 16:44:35
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lingkai11111

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by 战斗节能 at 2014-05-19 16:44:35
染噬菌体了!非常确定你这个的可能性 。

没有噬菌斑啊,是不是噬菌斑验证不可靠?我是把异常的发酵液点在涂布的平板上,但是没有看到透明圈,倒是点发酵液那块菌落更多了
8楼2014-05-19 17:25:48
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wangju87c

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌种是不是有污染?这很可能是菌种里带杂菌。一般摇瓶实验染噬菌体不会是培养基或者环境问题,上发酵罐才会有噬菌体的问题吧

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哥已婚
9楼2014-05-21 10:20:44
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lingkai11111

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by wangju87c at 2014-05-21 10:20:44
菌种是不是有污染?这很可能是菌种里带杂菌。一般摇瓶实验染噬菌体不会是培养基或者环境问题,上发酵罐才会有噬菌体的问题吧

哦 这样啊 我的菌是浑浊后(有时候也不浑浊),澄清,过十几个小时后又会浑浊,也会产目的蛋白,但是活性有所降低,这种情况会是染噬菌体吗?用师姐的菌也出现类似情况,怀疑是培养基问题。。。
10楼2014-05-21 21:58:25
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