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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 重组大肠杆菌培养的问题
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lingkai11111

新虫 (小有名气)

[求助] 重组大肠杆菌培养的问题已有5人参与

各位前辈好，小弟不才，愚钝异常，培养大肠杆菌中出现问题，譬如发酵六瓶（LB转接至TB培养基），有一瓶长的比较正常，另外几瓶要么长不起来一直澄清，要不先浑浊后来澄清(发酵液中有丝状悬浮物），另外有一次培养过夜后菌体都长起来了。总体说，这六瓶较以前正常情况时更粘稠，泡沫也增多，气味更难闻。怀疑是噬菌体感染，但是实验室其他同学做大肠杆菌培养都很正常，另外我用这些发酵液划线没有杂菌，也没出现噬菌斑；之前怀疑菌种老化，但是活化菌种多次，每次都出现相同情况；也想过是培养基优化后C:N变化导致，但是用以前的培养基培养照样出现相同情况！不知道是什么原因，请各位高手不吝指教，小弟感谢不尽。。。
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1楼2014-05-18 16:29:53
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by lingkai11111 at 2014-05-19 12:14:02
种子培养基培养十个小时还是澄清的，里面有好多丝状物！两个小时后去看，变混浊了！气泡比较多，感觉较粘稠！
...

有气泡粘稠可能是杂菌，大肠杆菌不至于长10h，大肠的传代是很快的。
给环境、瓶子等这些实验器材都做一次灭菌吧，另外，验证下你的菌种好着没有。
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6楼2014-05-19 15:18:40
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉像是染菌，六瓶培养基是平行的吗？个别瓶子染菌见过，还没见过每次都是这么染菌的。
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2楼2014-05-18 21:02:32
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lingkai11111

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by laozuzunzhe at 2014-05-18 21:02:32
感觉像是染菌，六瓶培养基是平行的吗？个别瓶子染菌见过，还没见过每次都是这么染菌的。

这次是接种量不一样，不过以前平行的也是这种情况。。。昨天种子培养基都没长起来啊。。。是不是菌种活化的问题？
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3楼2014-05-19 08:30:07
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laozuzunzhe

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
zhang8826857: 金币+3, 你懂的O(∩_∩)O 2014-05-19 10:45:35
如果是相同菌种接种的，同时出现了正常和异常的发酵瓶，说明菌种应该是没问题，问题只能是培养基或培养条件。菌种有问题不会出现正常发酵瓶。
接种量在延迟期差异表现比较明显，接种量少的前期一直长不起来。一般按8%左右接种都是没问题的。
种子培养基一般是LB，这个培养基上都长不出来？看看你的菌是否带抗性，再看下你加的抗生素对不对，大肠杆菌在LB上很好长出来啊。或者菌有问题了，换菌种。
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lingkai11111
4楼2014-05-19 09:00:42
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