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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 新人求助 菌类蛋白电泳样品怎样制备
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mars731

新虫 (初入文坛)

[求助] 新人求助 菌类蛋白电泳样品怎样制备 已有1人参与

不知道怎样操作，之前样品都跑不出条带，操作没问题，应该是样品处理不对，求正确方法！菌是平板培育的
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1楼 2014-05-17 11:25:48
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junboliang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先收集平板上的菌，离心后超声破菌或者直接加一定量的强裂解液！
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2楼2014-05-17 11:41:21
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mars731

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by junboliang at 2014-05-17 11:41:21
先收集平板上的菌，离心后超声破菌或者直接加一定量的强裂解液！

谢谢，震荡裂解可不可以？
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3楼2014-05-17 12:08:30
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junboliang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
mars731: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-05-17 16:51:24
建议在PBS中直接超声！或者用loading buffer裂解，当然这样就无法测蛋白浓度了；你也可以配一种裂解液，就是loading buffer去掉溴酚蓝，这样既可以裂解充分，也可以测蛋白浓度。
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4楼2014-05-17 12:33:29
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mars731

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by junboliang at 2014-05-17 12:33:29
建议在PBS中直接超声！或者用loading buffer裂解，当然这样就无法测蛋白浓度了；你也可以配一种裂解液，就是loading buffer去掉溴酚蓝，这样既可以裂解充分，也可以测蛋白浓度。

就是可以取菌直接加loading buffer煮沸5min，制备？
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5楼2014-05-17 12:40:02
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junboliang

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by mars731 at 2014-05-17 12:40:02
就是可以取菌直接加loading buffer煮沸5min，制备？...

可以的，我做蛋白表达的时候就这么做，可以试一下
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6楼2014-05-17 13:07:07
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mars731

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by junboliang at 2014-05-17 13:07:07
可以的，我做蛋白表达的时候就这么做，可以试一下...

非常感谢！！
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7楼2014-05-17 13:10:38
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