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小桥流水06

金虫 (小有名气)

[求助] 做高效液相色谱要注意哪些 已有4人参与

做了快一个月的液相了,不知道为啥同一个样品进两次样有时峰面积差别好大,,做标准曲线时也是
今天偶尔和另一做标准曲线的同学交流,她说流动相每次最少要超声15min,标样也要过膜,我表示每次超声几分钟就拎起来了,标样更没过膜
瞬间崩溃呀,做了这么久液相,白搭了??~~~~(>_<~~~~
各位前辈液相经验丰富的有啥经验提点提点啊,跪求
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fayfeifei

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
nickxiaotong: 金币+2, 感谢提供建议,欢迎常来环境版交流 2014-05-15 14:34:13
关于流动相超声,主要目的是为了脱气,所以如果你的系统里没有气泡,这个问题排除。
关于样品过膜,主要目的是为了保护进样口和色谱柱,以免不溶颗粒损伤机器。但基本上这个对你出峰面积没有影响。
如果你的问题主要集中在同一样品出现很大差别的峰面积的情况,你可以考虑以下几点:
1 如果是手动进样,那样确保自己的进样手法稳定;如果是机器进样,那么要排查一下系统进样器是否有故障。
2 另一种可能是你的峰型不完美,或杂峰太多,导致机器自动积分有误差。比如基线可能不平,有时候自动积分的时候把别的小峰也算进去了。
3 也可能是流动相并不能完全将样品峰洗脱下来,导致有时候出的多有时候出的少,结果不稳定。
暂时想到这些可能,你可以一一排查。
To be a true scientist!
4楼2014-05-15 09:14:36
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