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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 液相测溶出配的对照品峰面积明显偏小
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kingluyi23

金虫 (职业作家)

[求助] 液相测溶出配的对照品峰面积明显偏小已有5人参与

如题，，现用HPLC测一个药的溶出，对照品溶液完全是按照质量标准里面的方法配制（先乙腈溶解，再用溶出介质4.4醋酸盐缓冲液稀释至10ug/ml浓度）;;;结果出来的峰面积才只有67； 而不用溶出介质稀释的对照溶液峰面积（也是10ug./ml)则有305 ；请问各位做分析的 达人们 帮我分析一下 ，问题可能出在哪里？？该如何解决呢？？？
（在下之前一直是做制剂的，对于分析的液相溶出方法学实在是经验偏少，故来此求助）

[ Last edited by 1949stone on 2014-5-13 at 15:33 ]
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想要飘逸的人生，还得先脚踏实地
1楼2014-05-13 12:40:55
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.你是对照使用溶出介质稀释了，峰面积是67，而不用溶出介质稀释的是305，说明三点，第一你的样品可能在介质中析出，过滤时直接去掉了，第二，你的样品在溶出介质中不稳定，第三，你选择的滤膜、注射器是否对药物有吸附，这种吸附在不同溶剂中不太一样
2.你的样品在紫外条件下发生红移，或者蓝移，峰面积不一致
3.你的方法是否经过严格验证？
4.你在稀释中是否存在操作误差，是否进行多次重复试验结果都是这样
5.你的单位是什么，峰面积这么小，是否高于液相的定量限，在如此小的峰面积下，定量往往不准
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3楼2014-05-13 13:20:18
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4253506

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如你描述不是HPLC问题，是你的样品在稀释过程中析出了，最简单验证办法，将你的对照品溶液稀释一倍进样，看峰面积是不是等比例变小。
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9楼2014-05-13 16:00:35
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普通回帖

星海慧儿

荣誉版主 (职业作家)

木虫精灵

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的样品在酸里面稳定吗？是不是在酸中不稳定降解了。还有纯度折合了没有？
另外最好还是换一个人再重新配制一遍，也可能是样品配制过程中配得不对导致的，换个人有助于发现问题。
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我是超级天后：天天努力，不落人后！
2楼2014-05-13 12:49:42
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taoweijian

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
操作问题吧！对照品是成盐对照品么？还是单纯物质，如果是新药，客户方法不一定对的，我们公司就经常遇见否定客户方法，还是国外大公司
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4楼2014-05-13 13:56:34
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kingluyi23

金虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 星海慧儿 at 2014-05-13 12:49:42
你的样品在酸里面稳定吗？是不是在酸中不稳定降解了。还有纯度折合了没有？
另外最好还是换一个人再重新配制一遍，也可能是样品配制过程中配得不对导致的，换个人有助于发现问题。

多谢版主大人的回复！

我用的ph4.5溶出介质稀释的。（这个是标准介质），应该是稳定的。

现在我在找原因，  我想把该对照液在进样之前再超声半小时 看看。（怀疑是用乙腈溶解主药后 再加入溶出介质 使得药又析出了）

另外 我还怀疑是滤膜吸附的问题，所以弄了一个没过滤直接进样的  看看。
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5楼2014-05-13 14:31:19
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kingluyi23

金虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by voyager88 at 2014-05-13 13:20:18
1.你是对照使用溶出介质稀释了，峰面积是67，而不用溶出介质稀释的是305，说明三点，第一你的样品可能在介质中析出，过滤时直接去掉了，第二，你的样品在溶出介质中不稳定，第三，你选择的滤膜、注射器是否对药物有 ...

多谢大神的回复！

1.我仔细肉眼观察 该对照溶液  确实是澄清的啊，看不到有微粒在里面，所以我认为应该是溶解得比较完全的了。   确实，我也怀疑是过滤的时候，主药被吸附了一部分走了，因为这个药是难溶性的，而且粒径比较小的。 溶出取样用的 滤膜吸附试验我做了好几次了，确实是有吸附的。

2. 但我用质量标准里的混合溶剂（乙腈：磷酸：水）溶解主药配对照峰面积是正常的啊，做了10次左右 峰面积都是305左右，很稳定啊。

3. 方法是质量标准里的，应该不会错，现在就是这个对照液的峰面积出现问题。
4. 这个操作问题 不好说，我再多做几次。

5.溶液溶度是11ug/ml
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想要飘逸的人生，还得先脚踏实地
6楼2014-05-13 14:51:19
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kingluyi23

金虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by taoweijian at 2014-05-13 13:56:34
操作问题吧！对照品是成盐对照品么？还是单纯物质，如果是新药，客户方法不一定对的，我们公司就经常遇见否定客户方法，还是国外大公司

对照品 是 原料药呀。（主药）。  是仿制药，不是新药哦
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想要飘逸的人生，还得先脚踏实地
7楼2014-05-13 14:52:06
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voyager88

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by kingluyi23 at 2014-05-13 14:51:19
多谢大神的回复！

1.我仔细肉眼观察 该对照溶液  确实是澄清的啊，看不到有微粒在里面，所以我认为应该是溶解得比较完全的了。   确实，我也怀疑是过滤的时候，主药被吸附了一部分走了，因为这个药是难溶性的， ...

那就最大的可能，你的介质溶解性太差，肉眼是看不出来的，你晃一晃再进一针，看峰面积与以前的一样不？最好的办法就是配完溶液，立即放入紫外进行时间扫描，就能看出来了；还有个办法就是稀释样品，再看稀释完测定的浓度乘以稀释倍数是否等于你稀释前的浓度，前提是线性没有问题
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微信公众号：Pharmaguider（药事纵横），主页：www.pharmaguider.cn
8楼2014-05-13 15:45:42
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星海慧儿

荣誉版主 (职业作家)

木虫精灵

优秀版主优秀版主
引用回帖:
5楼: Originally posted by kingluyi23 at 2014-05-13 14:31:19
多谢版主大人的回复！

我用的ph4.5溶出介质稀释的。（这个是标准介质），应该是稳定的。

现在我在找原因，  我想把该对照液在进样之前再超声半小时 看看。（怀疑是用乙腈溶解主药后 再加入溶出介质 使得药又 ...

嗯，你这几点确实也很有可能导致峰面积诡异的原因，祝你好运喽。
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10楼2014-05-13 16:23:00
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