应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » EMSA相关，求助
51/1返回列表
查看: 3148  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jamy1989

木虫 (小有名气)

[求助] EMSA相关，求助 已有2人参与


最近在做EMSA的竞争性实验，如图所示，从左到右。
1：1%BSA和标记DNA对照
2：蛋白和标记DNA
3：蛋白和标记DNA 另外加了50倍的竞争性DNA
4：蛋白和标记DNA，另外加了50倍的非竞争性DNA
请问第3条带子为什么变淡了，按道理有竞争性DNA上去后，标记的DNA不是应该有一部分跑在下面吗？有没有谁做过类似的实验？遇到类似的现象？怎么解释？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 有用的东东

» 本帖@通知

@凌波丽 @biostar2009 @wizardfan

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
qwdr
1楼 2014-05-09 16:47:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
jamy1989: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-05-11 21:28:33
引用回帖:
6楼: Originally posted by jamy1989 at 2014-05-11 08:27:52
首先，谢谢你，你说的很有道理！你比较一下我那2,3,4号条带，它的宽细都差不多，应该不算弥散吧，蛋白浓度低时，条带就很宽，明显很散的样子，但这个好像就是亮度变淡了，会不会是加入竞争性DNA后，有一部分标记的 ...

我遇到的弥散，并不是说是宽度的变化，而是分布在泳道上下很大的范围，比如从free-probe到shift之间，因为在这种蛋白：核酸比例下，形成了很多中间状态的complex，分布在泳道大小不同的位置，导致信号显得丢失了。
至于是不是没有入孔，或者是不是这一管probe压根就给少了，这更多的是操作上面的问题，空说无凭了，你要自己control，实验需要重复。
赞一下 回复此楼
7楼2014-05-11 14:18:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jamy1989(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-10 08:26:48
jamy1989: 金币+5, ★有帮助 2014-05-10 14:00:43
这个还算常见。probe弥散了。你要做更细的比例梯度，寻找合适的点。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-10 00:47:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
EMSA做起来很麻烦，建议采用DPI-ELISA

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-10 07:24:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jamy1989

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-05-10 00:47:29
这个还算常见。probe弥散了。你要做更细的比例梯度，寻找合适的点。

我做了蛋白浓度梯度的EMSA，在蛋白浓度低的时候是会出现探针弥散，蛋白浓度高时探针就不会弥散，上面这个图是用高浓度蛋白做的，3号条带只是变淡了，能算弥散吗？
赞一下 回复此楼
qwdr
4楼2014-05-10 14:03:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-29 19:27 by cqwQDCxMcL3I
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:54 by yCO1Ll7aHtsw
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:47 by yCO1Ll7aHtsw
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 4/200 2026-09-29 16:37 by etmYJ6d2rquH
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 4/200 2026-09-29 15:15 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:04 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:41 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:24 by etmYJ6d2rquH
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:13 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 3/150 2026-09-29 13:56 by etmYJ6d2rquH
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-29 09:49 by JzYBbHIXWSrW
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +3 tianxiaoxian 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:44 by tianxiaoxian
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭