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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 合成表征 » 跟大家讨论一下EDC-NHS活化带羧基颗粒的用量问题
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河水流云

木虫 (正式写手)

[交流] 跟大家讨论一下EDC-NHS活化带羧基颗粒的用量问题 已有4人参与

本人最近在做将一个带羧基的颗粒连接到一个带羧基的颗粒表面，用的是EDC-NHS活化的方法
通过查阅相关知识得出羧基比EDC为1：10的量，EDC:NHS约1：5
我的颗粒是通过表面包裹PAA（聚丙烯酸），其单体的相对分子质量为72
我用300mg的PAA包裹我的颗粒，则300mgPAA理论上含有4.2mmol羧基，假设我的颗粒表面实际的羧基总量在最终活化时为3mmol
那么EDC则要30mmol也就是要用5.75g
而NHS则用75mmol，也就是8.63g
通过这样一估算感觉这EDC和NHS的用量也太大了，我不知道问题出在那了，求大神指点一下，回头小红花献上
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1楼 2014-04-18 15:35:45
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河水流云

木虫 (正式写手)
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2楼2014-04-18 17:51:23
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河水流云

木虫 (正式写手)
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3楼: Originally posted by 阿斯蒂芬 at 2014-04-18 21:17:14
不用过量这么多倍。
我自己做的往蛋白上接，羧基的量和EDAC的量比是1:1.2~1.5.
EDAC：NHS是1：1

连接效果怎么样，能告诉我一下您的操作过程吗，我要具体一点，特别是反应时间以及在用EDC-NHS活化后第二步与氨基反应的时候要不要对带羧基的蛋白洗涤，要洗几次？
谢谢
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哈呀呀
4楼2014-04-18 22:07:01
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河水流云

木虫 (正式写手)
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5楼: Originally posted by Jane-zhu at 2014-04-19 15:36:34
楼主首先你计算不严密，你用的是聚丙烯酸，那就不能按照单体的分子量72算。据我所知，聚丙烯酸根据聚合度不同，分子量也不同（我用过1800的）。还有你用300mg包裹你的颗粒，那么你能确定这300mg全部包裹上去而没有损 ...

因为每个单体上有一个羧基所以按72也只是算个大概，你说的确实是问题所在，其实这个问题就是在于我的颗粒上的所有羧基到底是在那一个数量级范围。这样的话用EDC的量就不好确定了。
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7楼2014-04-20 08:55:02
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河水流云

木虫 (正式写手)
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8楼2014-04-20 22:46:48
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河水流云

木虫 (正式写手)
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9楼: Originally posted by Jane-zhu at 2014-04-22 09:44:19
这个个人觉得要摸索，调到合适的浓度梯度范围...

嗯，其实我只要能连上就行了，这玩意我做了一个多月一直没做出来，不知道是包PAA出问题了还是修饰氨基出问题了还是这边的活化出问题了，后面验证觉得最有可能是这边活化出问题了，以后不懂的再向你请教
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10楼2014-04-22 16:01:41
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河水流云

木虫 (正式写手)
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11楼: Originally posted by anaprilapple at 2014-04-25 17:13:08
恩 ，差不多。我也是这么个比例做的，但最终产率不是很高啊...

那现在这个问题解决了吗
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12楼2014-04-25 18:46:39
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河水流云

木虫 (正式写手)
我的颗粒没有呃，用量的话貌似我震荡的时候就沉降了，不过TEM数据显示颗粒还是分散的，水溶性没多大改变吧
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15楼2014-08-23 23:28:32
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河水流云

木虫 (正式写手)
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16楼: Originally posted by wlicecream at 2014-12-15 22:32:35
你好！我现在也在用EDC和NHS连羧基和氨基，情况和你说的类似，连接效率极低，请问你当初是在水中做的还是DMF中做的，现在问题解决了吗？需要注意什么才能连上啊？温度？PH？不胜感激...

在水中，现在解决了，主要是活化时间，活化羧基时间15min不能再长了，
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17楼2014-12-16 19:05:18
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河水流云

木虫 (正式写手)
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19楼: Originally posted by 苍耳心 at 2015-01-23 10:23:03
请问不需要在PBS中吗? 是先将带羧基的和EDC、NHS 加一起，然后再加入带氨基的吗？...

是先在MES pH6左右，加EDC NHS 活化15min， 然后离心，再在PBS pH7活化过夜就行
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20楼2015-01-23 12:10:22
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