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河水流云

木虫 (正式写手)

[交流] 跟大家讨论一下EDC-NHS活化带羧基颗粒的用量问题 已有4人参与

本人最近在做将一个带羧基的颗粒连接到一个带羧基的颗粒表面，用的是EDC-NHS活化的方法
通过查阅相关知识得出羧基比EDC为1：10的量，EDC:NHS约1：5
我的颗粒是通过表面包裹PAA（聚丙烯酸），其单体的相对分子质量为72
我用300mg的PAA包裹我的颗粒，则300mgPAA理论上含有4.2mmol羧基，假设我的颗粒表面实际的羧基总量在最终活化时为3mmol
那么EDC则要30mmol也就是要用5.75g
而NHS则用75mmol，也就是8.63g
通过这样一估算感觉这EDC和NHS的用量也太大了，我不知道问题出在那了，求大神指点一下，回头小红花献上
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Eukarya

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1楼 2014-04-18 15:35:45
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河水流云

木虫 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 苍耳心 at 2015-01-23 10:23:03
请问不需要在PBS中吗? 是先将带羧基的和EDC、NHS 加一起，然后再加入带氨基的吗？...

是先在MES pH6左右，加EDC NHS 活化15min， 然后离心，再在PBS pH7活化过夜就行
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20楼2015-01-23 12:10:22
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河水流云

木虫 (正式写手)
自己顶一个
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2楼2014-04-18 17:51:23
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阿斯蒂芬

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不用过量这么多倍。
我自己做的往蛋白上接，羧基的量和EDAC的量比是1:1.2~1.5.
EDAC：NHS是1：1
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河水流云
3楼2014-04-18 21:17:14
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河水流云

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 阿斯蒂芬 at 2014-04-18 21:17:14
不用过量这么多倍。
我自己做的往蛋白上接，羧基的量和EDAC的量比是1:1.2~1.5.
EDAC：NHS是1：1

连接效果怎么样，能告诉我一下您的操作过程吗，我要具体一点，特别是反应时间以及在用EDC-NHS活化后第二步与氨基反应的时候要不要对带羧基的蛋白洗涤，要洗几次？
谢谢
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哈呀呀
4楼2014-04-18 22:07:01
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