应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助关于质粒
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1009  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lyz65956

木虫 (正式写手)

[交流] 求助关于质粒

有一批别人赠送的克隆质粒， 各种原因， 无法知道其详细信息。
知道有我的目的基因大概七八千， 但是由于是环状DNA想通过测序找到其线性化位点
试过许多的通用引物 比如 M13 T7等 测序了大部分。
其中有小部分无法测序成功，或者测到的序列为载体序列，将测到的序列比对发现为载体序列 但是有很多的载体，
请问有什么办法可以测序，判断出到底什么载体 或者更好的办法知道 目的基因的线性位点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
对自己更好点
1楼 2014-04-11 13:58:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biostar2009

专家顾问 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by lyz65956 at 2014-04-11 14:21:18
因为原来的目的序列是环状的 所以我不知道头和尾在哪里
用特异性引物测了2K硬是没找出来。。。...

我大概懂你的情况了，就是说你要的基因，自然情况也是个圈，现在套在更大的一个质粒圈里面了？
然后还有七八千。。。
一个省事的办法，就是继续测，总能测到载体上的，这样你一旦知道一个头，肯定另一个也知道了。
另一个复杂一点也不见得搞得出来的办法，找到你基因上的酶切位点，
两两组合去切
虽然载体上可能也有这个位点会掉下来片段，但是应该不影响
关注你两两组合的产物大小存不存在
比如HindIII BamHI XhoI XbaI
比如HindIII和BamHI中间应该是2K，如果掉下来是2K，那说明这中间是连着的
如果掉下来不是2K，变得很大，那说明线性化装入载体这个大圈的位置应该就在这两个位点中间。
呵呵，这个等于在做物理图谱了
虽然麻烦一点，但是可能会比测序更快，你一次可以切很多组合。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

lyz65956
7楼2014-04-11 14:41:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

biostar2009

专家顾问 (正式写手)
★ ★ ★
lyz65956(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-30 14:00:42
至少你还知道你的基因序列，里面有什么位点是清楚的。
这个时候，就不要去找通用引物了。
你的序列已知，一头一尾设计个引物，测头尾，看看头尾有没有剩下什么酶切位点。
这事不就结了。
赞一下 回复此楼
2楼2014-04-11 14:18:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyz65956

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-04-11 14:18:54
至少你还知道你的基因序列，里面有什么位点是清楚的。
这个时候，就不要去找通用引物了。
你的序列已知，一头一尾设计个引物，测头尾，看看头尾有没有剩下什么酶切位点。
这事不就结了。

因为原来的目的序列是环状的 所以我不知道头和尾在哪里
用特异性引物测了2K硬是没找出来。。。
赞一下 回复此楼
对自己更好点
3楼2014-04-11 14:21:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyz65956

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by biostar2009 at 2014-04-11 14:41:10
我大概懂你的情况了，就是说你要的基因，自然情况也是个圈，现在套在更大的一个质粒圈里面了？
然后还有七八千。。。
一个省事的办法，就是继续测，总能测到载体上的，这样你一旦知道一个头，肯定另一个也知道了 ...

恩 明白了 谢谢
看来果然没有什么比较简便的方法
赞一下 回复此楼
对自己更好点
10楼2014-04-11 15:05:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学一志愿南京师范大学303求调剂 +3 zzffylgg 2026-03-24 3/150 2026-03-27 10:42 by shangxh
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 275求调剂 +3 jjjjjjjjjjl 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:22 by guoweigw
[考研] 275求调剂 +10 Micky11223 2026-03-25 12/600 2026-03-27 09:41 by caszguilin
[考研] 316求调剂 +5 江辞666 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:08 by hypershenger
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-27 07:58 by chemisry
[考研] 325求调剂 +5 李嘉图·S·路 2026-03-23 5/250 2026-03-27 00:42 by wxiongid
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分，求调剂 +6 jiajunX 2026-03-22 6/300 2026-03-25 23:05 by licg0208
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 【2026考研调剂】制药工程 284分 求相关专业调剂名额 +4 袁奂奂 2026-03-25 8/400 2026-03-25 14:32 by lbsjt
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭