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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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水姿叶落

新虫 (初入文坛)

[求助] Southern blot 转膜前胶的处理 已有2人参与

用罗氏的Southern blot试剂盒做转膜之前,凝胶电泳跑的胶要如何处理?说明书上只写了常规的转膜方法都可用,没有写胶要怎么处理。我想用真空转印仪进行转膜。
谢谢各位~~
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shuangyin

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

首先看目的片段是不是大于5kb,来决定做不做脱嘌呤处理
然后做变性,15分钟两次,然后如楼上所说中和液中和之后20 ssc转膜
但是我实验中是变性之后不中和,然后直接用变性液转膜,很方便,效果也很好,我也是bio-rad的真空转膜仪。
另外,southern其实并不好做的。你用这个试剂不能只看说明书那几页的,roche的网站上关于DIG dna这方面有一本一百多页的pdf,详细说了各方面的技术细节,一定要吃透的。
3楼2014-08-30 09:38:58
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mdzgood123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-04-30 10:42:18
先加4倍体积的变性缓冲液,摇晃30分钟。
再加4倍体积的中性缓冲液,摇晃30分钟。
就可以转了
2楼2014-04-29 21:07:42
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