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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » Southern blot 转膜前胶的处理
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水姿叶落

新虫 (初入文坛)

[求助] Southern blot 转膜前胶的处理 已有2人参与

用罗氏的Southern blot试剂盒做转膜之前，凝胶电泳跑的胶要如何处理？说明书上只写了常规的转膜方法都可用，没有写胶要怎么处理。我想用真空转印仪进行转膜。
谢谢各位~~
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1楼 2014-04-04 17:27:45
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mdzgood123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-04-30 10:42:18
先加4倍体积的变性缓冲液，摇晃30分钟。
再加4倍体积的中性缓冲液，摇晃30分钟。
就可以转了
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2楼2014-04-29 21:07:42
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shuangyin

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

首先看目的片段是不是大于5kb，来决定做不做脱嘌呤处理
然后做变性，15分钟两次，然后如楼上所说中和液中和之后20 ssc转膜
但是我实验中是变性之后不中和，然后直接用变性液转膜，很方便，效果也很好，我也是bio-rad的真空转膜仪。
另外，southern其实并不好做的。你用这个试剂不能只看说明书那几页的，roche的网站上关于DIG dna这方面有一本一百多页的pdf，详细说了各方面的技术细节，一定要吃透的。
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3楼2014-08-30 09:38:58
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