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请教血浆蛋白结合率的问题 已有1人参与
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本人已经测定完了血药浓度，但是还想做此血浆蛋白结合率的测定，许多地方都不懂，查了文献关于具体步骤少之又少，实在不解，望专业人士不吝赐教。 1关于具体膜的选择，完全不懂 2具体的实验步骤 3关于方法的验证问题，是不是无论采用何种方法都要验证，比如我已经建立了血药浓度的HPLC的方法，但是如果要是在检测经过半透膜滤过的血浆样品，是不是会有缓冲液的影响（我的流动相中没有磷酸缓冲液）是不是要重新建立一套检测方法，然后再做方法学的验证，最后在测定浓度。 |
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具体可以参考这篇文献，步骤很详细，通常用的都是密理博的超滤管（10k）。 http://pan.baidu.com/share/link? ... p;amp;uk=3542402689 |
2楼2014-03-28 17:26:52
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我用的是超滤法，买的是密理博的超滤管，一般打电话问有没有做血浆蛋白结合率用的超滤管的话销售会不清楚，因为超滤管主要是用作浓缩蛋白的。所以你就知道是浓缩蛋白的超滤管就可以了。一般有10K，30K两种，膜的话就只有一种，如果你的药物分子量比较大的话建议使用30K，两种孔径的差别一在于分子量，二在于离心效率，10K离下来的少，所以花的时间要长一些，我比较过，分子量小的药物这两种管子的血浆蛋白结合率没有差异。 然后是考察吸附，因为药物在膜上可能有吸附，吸附大就无法测准了，所以我是先用空白血浆制备一些超滤下清液（就是用4000转10min一次不停的离心），用下清液配制你的药物，然后再按常规速度和时间超滤，测定滤下来的液体中药物的浓度，用同一根超滤管每次新鲜配制含药物的液体后连续超滤，直至滤下来的液体和加进去的药物浓度一致，说明连续超滤n次后饱和了。然后正式测定血浆蛋白结合率时就用这个次数去超滤。还有要确定一下血浆37℃孵育时间（因为你用的是外添加法，药物和蛋白结合需要时间），一般是20min。最后是每一种液体都用其自身的基质配制标曲和质控后测定样品，且测定的所有液体都要进行方法学验证，比如下清液和血浆（包括线性范围、残留、干扰以及稳定性），你试验中遇得到的条件都必须验证，用不到的就不用了（比如长期稳定性、冻融等）。 |
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