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xxls1990铁虫 (初入文坛)
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[求助]
荧光PCR-探针方法
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| 求助大家，我做荧光PCR，参照标准SN-T 1870-2007中提供的金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的引物及其探针，由某公司合成，采用探针方法，为什么曲线没有起跳呢，ct值几乎为0，我采用的是探针方法两步法，95℃预变性3min,95℃变性10s,60℃40s,同时采集FAM信号，40个循环，不知问题出在什么地方，引物和探针浓度都是10uM，仪器为罗氏的LC96，试剂是TAKALA的MIX 2X，20ul体系。一步一步都是按照操作来的，上机器之前还离心过，会害死什么原因呢？O(∩_∩)O谢谢大家 |
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