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xxls1990

铁虫 (初入文坛)

[求助] 荧光PCR-探针方法

求助大家,我做荧光PCR,参照标准SN-T 1870-2007中提供的金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的引物及其探针,由某公司合成,采用探针方法,为什么曲线没有起跳呢,ct值几乎为0,我采用的是探针方法两步法,95℃预变性3min,95℃变性10s,60℃40s,同时采集FAM信号,40个循环,不知问题出在什么地方,引物和探针浓度都是10uM,仪器为罗氏的LC96,试剂是TAKALA的MIX 2X,20ul体系。一步一步都是按照操作来的,上机器之前还离心过,会害死什么原因呢?O(∩_∩)O谢谢大家
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