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安静旅游吧

新虫 (正式写手)

[求助] 请问这样能否发生荧光能量共振转移 已有1人参与

蓝色的是供体的发射曲线,红色的是受体固定激发扫的发射曲线(所以受体本身也是有荧光的)。请问两者能发生荧光能量共振转移吗?如果当两都的距离很远时(大于10 nm)荧光能量共振转移是否会抑制?
红色受体的紫外吸收浓度太低,药品太精贵,不能去测紫外吸收。
老板不让做,说这个不能实现。自己想试,没试剂。

请问这样能否发生荧光能量共振转移
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袁1231

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2014-03-23 15:32:13
安静旅游吧: 金币+1 2014-03-23 20:00:49
超过10nm通常的说法是不会发生FRET了,你这个给的信息也没什么用,重点还是要看你红色的吸收光谱啊,会不会与蓝色的发射有相当的重叠,同时红色的发射又要与蓝色的发射要有一定的区分度,个人觉得FRET不是个简单的课题
2楼2014-03-23 09:21:53
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安静旅游吧

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 袁1231 at 2014-03-23 09:21:53
超过10nm通常的说法是不会发生FRET了,你这个给的信息也没什么用,重点还是要看你红色的吸收光谱啊,会不会与蓝色的发射有相当的重叠,同时红色的发射又要与蓝色的发射要有一定的区分度,个人觉得FRET不是个简单的课 ...

就是没有找到红色的吸收光谱呀,也没办法测,老师不支持,不敢把药品拿来测,太精贵了,可能一测3000块就没有了。
一般红色的吸收前半部分与蓝色发射重叠,这样就能发生FRET。假设红色的吸收就是跟这激发光谱差不多呢,是否就不能够确定能发生FRET?老板说,就算能发生,但是红色也会吸收蓝色的激发光,不能区分是否是因为FRET使得红色曲线物质发光。
3楼2014-03-23 20:00:33
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袁1231

金虫 (小有名气)


黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2014-03-25 09:07:10
引用回帖:
3楼: Originally posted by 安静旅游吧 at 2014-03-23 20:00:33
就是没有找到红色的吸收光谱呀,也没办法测,老师不支持,不敢把药品拿来测,太精贵了,可能一测3000块就没有了。
一般红色的吸收前半部分与蓝色发射重叠,这样就能发生FRET。假设红色的吸收就是跟这激发光谱差不 ...

你要有一个control,就是当距离足够远的时候,发生不了FRET,这个时候红色和蓝色发射的比值是不是发生了变化。 你这重叠的不是很多。如果样品测了可以回收的话就行啊。还有一个问题就是你这东西吸收这么低,不会担心即使能FRET,你有办法检测么。
4楼2014-03-25 03:23:38
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安静旅游吧

新虫 (正式写手)

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4楼: Originally posted by 袁1231 at 2014-03-25 03:23:38
你要有一个control,就是当距离足够远的时候,发生不了FRET,这个时候红色和蓝色发射的比值是不是发生了变化。 你这重叠的不是很多。如果样品测了可以回收的话就行啊。还有一个问题就是你这东西吸收这么低,不会担 ...

意思是两者直接混合后,改变两者浓度比,看荧光强度是否会发生变化;若变化,则不是FRET?但是浓度变化了,各自的荧光强度是会发生变化的吧?
5楼2014-03-25 11:16:00
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安静旅游吧

新虫 (正式写手)

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4楼: Originally posted by 袁1231 at 2014-03-25 03:23:38
你要有一个control,就是当距离足够远的时候,发生不了FRET,这个时候红色和蓝色发射的比值是不是发生了变化。 你这重叠的不是很多。如果样品测了可以回收的话就行啊。还有一个问题就是你这东西吸收这么低,不会担 ...

当供体和受体直接混合,改变供体浓度时,受体的荧光强度不发生变化,是否就说明两都可以发生FRET?这是空白?
6楼2014-03-25 11:28:29
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安静旅游吧

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 袁1231 at 2014-03-25 03:23:38
你要有一个control,就是当距离足够远的时候,发生不了FRET,这个时候红色和蓝色发射的比值是不是发生了变化。 你这重叠的不是很多。如果样品测了可以回收的话就行啊。还有一个问题就是你这东西吸收这么低,不会担 ...

直接混合时,当固定受体浓度不变,把供体浓度降低,结果受体和供体的荧光都减弱了。这是为什么呢?
难道,直接混合时就发生FRET?
7楼2014-03-25 11:34:54
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袁1231

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2014-03-26 17:35:19
引用回帖:
7楼: Originally posted by 安静旅游吧 at 2014-03-25 11:34:54
直接混合时,当固定受体浓度不变,把供体浓度降低,结果受体和供体的荧光都减弱了。这是为什么呢?
难道,直接混合时就发生FRET?...

通常两者是要共价连着的,或者是共表达的两个蛋白,你这溶液里的,没听说过,而且荧光强度本来就受介质的影响,建议你多读些FRET的文章,再开始想怎么做,我也不是很懂,没做过,只读过。FRET对两者的距离要求很严格。
8楼2014-03-26 04:01:36
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安静旅游吧

新虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 袁1231 at 2014-03-26 04:01:36
通常两者是要共价连着的,或者是共表达的两个蛋白,你这溶液里的,没听说过,而且荧光强度本来就受介质的影响,建议你多读些FRET的文章,再开始想怎么做,我也不是很懂,没做过,只读过。FRET对两者的距离要求很严 ...

谢谢啦
9楼2014-03-26 11:25:44
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