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荧光共振能量转移中发射峰的问题
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dingruicnooc
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[交流]
荧光共振能量转移中发射峰的问题
最近在做一个荧光能量转移测金属离子的项目,基本想法是在硅胶表面标记荧光给体(555nm激发565nm发射),同时在该固体表面生长一些高分子,在高分子的顶端标记上荧光受体(650nm激发670nm发射),现在碰到很奇怪的现象,当设置激发波长在500nm的时候,设置扫描范围从510到700nm,先扫描空白去离子水,发现一小峰在600nm,这应该是水的RAMAN散射,然后扫描样品,发现在545nm处出现一强峰,以至于本该出现在565nm处的给体激发峰呈现为一肩峰,见图。想请教一下大家,545nm处的强峰是由于什么引起的呢,我的样品里并没有在545nm发射的物质啊。求高人不吝赐教。
121009.jpg
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2012-10-15 12:46:14
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
听不到: 金币+1, 积极参与交流,谢谢~
2012-10-16 23:51:21
个人认为给体的最大发射在555, 你现在用500激发,这中间相差了50 nm,如果是染料的话,我估计对发射光谱的强度影响不小。另外给体发射光谱看起来像是两个峰重叠的样子,这里面有可能是别的荧光团存在,也有可能是散射峰,或许你可以改变激发位置,然后再看看发射峰的强度和峰形的变化,估计可以弄清是散射造成的还是有其他荧光团存在。
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个人认为给体的最大发射在555, 你现在用500激发,这中间相差了50 nm,如果是染料的话,我估计对发射光谱的强度影响不小。另外给体发射光谱看起来像是两个峰重叠的样子,这里面有可能是别的荧光团存在,也有可能是散射峰,或许你可以改变激发位置,然后再看看发射峰的强度和峰形的变化,估计可以弄清是散射造成的还是有其他荧光团存在。
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