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dingruicnooc

铁虫 (小有名气)

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[交流] 荧光共振能量转移中发射峰的问题

最近在做一个荧光能量转移测金属离子的项目，基本想法是在硅胶表面标记荧光给体（555nm激发565nm发射），同时在该固体表面生长一些高分子，在高分子的顶端标记上荧光受体（650nm激发670nm发射），现在碰到很奇怪的现象，当设置激发波长在500nm的时候，设置扫描范围从510到700nm，先扫描空白去离子水，发现一小峰在600nm，这应该是水的RAMAN散射，然后扫描样品，发现在545nm处出现一强峰，以至于本该出现在565nm处的给体激发峰呈现为一肩峰，见图。想请教一下大家，545nm处的强峰是由于什么引起的呢，我的样品里并没有在545nm发射的物质啊。求高人不吝赐教。

121009.jpg

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1楼 2012-10-15 12:46:14

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stirfanny

木虫 (正式写手)

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个人认为给体的最大发射在555，你现在用500激发，这中间相差了50 nm，如果是染料的话，我估计对发射光谱的强度影响不小。另外给体发射光谱看起来像是两个峰重叠的样子，这里面有可能是别的荧光团存在，也有可能是散射峰，或许你可以改变激发位置，然后再看看发射峰的强度和峰形的变化，估计可以弄清是散射造成的还是有其他荧光团存在。