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安静旅游吧

新虫 (正式写手)

[求助] 请问这样能否发生荧光能量共振转移 已有1人参与

蓝色的是供体的发射曲线，红色的是受体固定激发扫的发射曲线（所以受体本身也是有荧光的）。请问两者能发生荧光能量共振转移吗？如果当两都的距离很远时（大于10 nm）荧光能量共振转移是否会抑制？
红色受体的紫外吸收浓度太低，药品太精贵，不能去测紫外吸收。
老板不让做，说这个不能实现。自己想试，没试剂。

请问这样能否发生荧光能量共振转移
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1楼 2014-03-22 17:05:55
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袁1231

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2014-03-26 17:35:19
引用回帖:
7楼: Originally posted by 安静旅游吧 at 2014-03-25 11:34:54
直接混合时，当固定受体浓度不变，把供体浓度降低，结果受体和供体的荧光都减弱了。这是为什么呢？
难道，直接混合时就发生FRET？...

通常两者是要共价连着的，或者是共表达的两个蛋白，你这溶液里的，没听说过，而且荧光强度本来就受介质的影响，建议你多读些FRET的文章，再开始想怎么做，我也不是很懂，没做过，只读过。FRET对两者的距离要求很严格。
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8楼2014-03-26 04:01:36
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袁1231

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2014-03-23 15:32:13
安静旅游吧: 金币+1 2014-03-23 20:00:49
超过10nm通常的说法是不会发生FRET了，你这个给的信息也没什么用，重点还是要看你红色的吸收光谱啊，会不会与蓝色的发射有相当的重叠，同时红色的发射又要与蓝色的发射要有一定的区分度，个人觉得FRET不是个简单的课题
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2楼2014-03-23 09:21:53
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安静旅游吧

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 袁1231 at 2014-03-23 09:21:53
超过10nm通常的说法是不会发生FRET了，你这个给的信息也没什么用，重点还是要看你红色的吸收光谱啊，会不会与蓝色的发射有相当的重叠，同时红色的发射又要与蓝色的发射要有一定的区分度，个人觉得FRET不是个简单的课 ...

就是没有找到红色的吸收光谱呀，也没办法测，老师不支持，不敢把药品拿来测，太精贵了，可能一测3000块就没有了。
一般红色的吸收前半部分与蓝色发射重叠，这样就能发生FRET。假设红色的吸收就是跟这激发光谱差不多呢，是否就不能够确定能发生FRET？老板说，就算能发生，但是红色也会吸收蓝色的激发光，不能区分是否是因为FRET使得红色曲线物质发光。
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3楼2014-03-23 20:00:33
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袁1231

金虫 (小有名气)
★
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2014-03-25 09:07:10
引用回帖:
3楼: Originally posted by 安静旅游吧 at 2014-03-23 20:00:33
就是没有找到红色的吸收光谱呀，也没办法测，老师不支持，不敢把药品拿来测，太精贵了，可能一测3000块就没有了。
一般红色的吸收前半部分与蓝色发射重叠，这样就能发生FRET。假设红色的吸收就是跟这激发光谱差不 ...

你要有一个control，就是当距离足够远的时候，发生不了FRET，这个时候红色和蓝色发射的比值是不是发生了变化。 你这重叠的不是很多。如果样品测了可以回收的话就行啊。还有一个问题就是你这东西吸收这么低，不会担心即使能FRET，你有办法检测么。
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4楼2014-03-25 03:23:38
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