| 查看: 2087 | 回复: 17 | |||
鬼羽帝魂木虫 (著名写手)
|
[求助]
关于重组克隆实验中遇到的比较奇怪的问题 已有3人参与
|
||
|
最近实验中遇到一个比较奇怪的问题： 在一个载体上用AscI+SmaI切下一片断，将目的基因连上（两端为AscI+SmaI）。目的基因是通过SOE-PCR做的，中间为SfiI酶切位点. 挑单克隆后，重组质粒要比原先的质粒小，而且SfiI切不开。或许有人说这是假阳性，我也知道，但奇怪的在下面。 我用载体上的另一个酶切位点SacI分别单酶切质粒与重组质粒，原先质粒可以切开线性化，而重组质粒却切不开。（两者反应条件一样） 在构建过程中，酶切位点SacI一直没有进行改动。 一位师兄说，可能载体制备的有问题，载体断开了。 我却觉得我重新做了3次都这样，是不是不是载体的问题？？？ 请各位分析一下，不胜感激。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 相似案例 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有247人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有用同源重组法进行基因克隆和载体构建的吗？
已经有8人回复
西门吹雪170
荣誉版主 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 92 (初中生)
- 贵宾: 0.982
- 金币: 27278.4
- 散金: 1072
- 红花: 40
- 沙发: 2
- 帖子: 3092
- 在线: 438.7小时
- 虫号: 1209807
- 注册: 2011-02-22
- 性别: MM
- 专业: 认知科学
- 管辖: 分子生物
2楼2014-03-03 22:21:45
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
鬼羽帝魂: 金币+4, ★有帮助 2014-05-31 16:45:36
鬼羽帝魂: 金币+4, ★有帮助 2014-05-31 16:45:36
|
可以试试这篇论文的方法，虽然是个小的改进，但是值得一试，而且很方便： http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256 |
17楼2014-03-25 09:41:59
  |
3楼2014-03-03 22:35:02
|
|
4楼2014-03-03 22:35:46
liygmail
至尊木虫 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 14357.4
- 红花: 5
- 帖子: 3410
- 在线: 820.3小时
- 虫号: 280786
- 注册: 2006-09-17
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传育种学
5楼2014-03-03 23:00:57
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2014-03-04 10:50:59
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
7楼2014-03-04 10:53:18
西门吹雪170
荣誉版主 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 92 (初中生)
- 贵宾: 0.982
- 金币: 27278.4
- 散金: 1072
- 红花: 40
- 沙发: 2
- 帖子: 3092
- 在线: 438.7小时
- 虫号: 1209807
- 注册: 2011-02-22
- 性别: MM
- 专业: 认知科学
- 管辖: 分子生物
8楼2014-03-04 11:55:05
9楼2014-03-04 12:00:07
| 祝福 |
10楼2014-03-04 12:44:41
