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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于重组克隆实验中遇到的比较奇怪的问题
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liuaynbin007
祝福
11楼2014-03-04 12:45:06
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-04 11:55:05
看大小直接跑个电泳图，为什么要先切开再看大小。。。可以把重组质粒跟未重组的质粒一起跑，比较一下大小试试，然后进行PCR验证是否有目的基因插入，这种方法不行吗？...

PCR验证没用，因为我是在启动子后面加了一个NOS,PCR检测不出来。因为不管怎么测，启动子，NOS都有。
先切开再看大小是因为质粒有3条带，不切开怎么比较？我是把重组质粒跟未重组的质粒单酶切以后一起跑的。
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12楼2014-03-04 14:32:36
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 小月亮1990 at 2014-03-04 12:00:07
建议还是要测序的，能知道那个酶切位点是不是真的还在，也许会有突变呢，要不碱基变了，你怎么换条件也是切不开的啊！

恩，说得很在理，就是没动的酶切位点也切不开，好奇怪的事情。
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13楼2014-03-04 14:33:21
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-04 14:32:36
PCR验证没用，因为我是在启动子后面加了一个NOS,PCR检测不出来。因为不管怎么测，启动子，NOS都有。
先切开再看大小是因为质粒有3条带，不切开怎么比较？我是把重组质粒跟未重组的质粒单酶切以后一起跑的。...

还是求高手指点吧
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
14楼2014-03-04 14:35:44
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-04 14:35:44
还是求高手指点吧...

恩啊。谢谢你呀，你挺称职的。
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15楼2014-03-04 14:41:02
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-04 14:41:02
恩啊。谢谢你呀，你挺称职的。...

谢谢啊
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
16楼2014-03-04 15:02:30
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ytetyio09

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
鬼羽帝魂: 金币+4, ★有帮助 2014-05-31 16:45:36
可以试试这篇论文的方法，虽然是个小的改进，但是值得一试，而且很方便：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2014-03-25 09:41:59
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by ytetyio09 at 2014-03-25 09:41:59
可以试试这篇论文的方法，虽然是个小的改进，但是值得一试，而且很方便：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256

谢谢
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18楼2014-03-25 15:36:05
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