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鬼羽帝魂木虫 (著名写手)
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[求助]
关于重组克隆实验中遇到的比较奇怪的问题 已有3人参与
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最近实验中遇到一个比较奇怪的问题： 在一个载体上用AscI+SmaI切下一片断，将目的基因连上（两端为AscI+SmaI）。目的基因是通过SOE-PCR做的，中间为SfiI酶切位点. 挑单克隆后，重组质粒要比原先的质粒小，而且SfiI切不开。或许有人说这是假阳性，我也知道，但奇怪的在下面。 我用载体上的另一个酶切位点SacI分别单酶切质粒与重组质粒，原先质粒可以切开线性化，而重组质粒却切不开。（两者反应条件一样） 在构建过程中，酶切位点SacI一直没有进行改动。 一位师兄说，可能载体制备的有问题，载体断开了。 我却觉得我重新做了3次都这样，是不是不是载体的问题？？？ 请各位分析一下，不胜感激。 |
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