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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

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专业: 生物物理、生物化学与分子

[求助] 关于重组克隆实验中遇到的比较奇怪的问题已有3人参与

最近实验中遇到一个比较奇怪的问题：
在一个载体上用AscI+SmaI切下一片断，将目的基因连上（两端为AscI+SmaI）。目的基因是通过SOE-PCR做的，中间为SfiI酶切位点.
挑单克隆后，重组质粒要比原先的质粒小，而且SfiI切不开。或许有人说这是假阳性，我也知道，但奇怪的在下面。
我用载体上的另一个酶切位点SacI分别单酶切质粒与重组质粒，原先质粒可以切开线性化，而重组质粒却切不开。（两者反应条件一样）
在构建过程中，酶切位点SacI一直没有进行改动。
一位师兄说，可能载体制备的有问题，载体断开了。
我却觉得我重新做了3次都这样，是不是不是载体的问题？？？
请各位分析一下，不胜感激。

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