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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » DNA中加入RNase A后出现严重降解
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biostar2009

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+5, 应助指数+1, 鼓励交流 2014-05-26 18:20:27
silicare: MolEPI+1 2014-05-27 13:09:39
话说你是用qubit HS定量，那咱就不怀疑你定量的结论了，我没有用过qubit HS，不知道qubit DNA对DNA duplex最小敏感是多长，对DNA和RNA的区分度有多大。
但是，RNaseA不管在什么情况下都是不可能切DNA的，这点几乎不可能质疑，RNaseA切割RNA是基于2‘-OH的，且不说DNA，就是2‘-O-Me修饰的RNA都不可能切开。
RNaseA因为在牛胰腺异常丰富，是一种分泌消化酶，所以一直以来商业化的RNaseA直接从牛胰分离，没有进行重组表达。胰腺是最丰富的消化腺，所以RNaseA污染一点其他的消化酶是有可能的。
关于这一点，科学趣闻就是，制造热狗的Armour&Co. 纯化了公斤级的RNaseA，任何科学家只要申请，可以免费赠送10 mg。
早期的RNaseA用粉末卖，回家跟普通试剂一样称重，溶解，然后煮沸灭活其他酶。
这是基于RNaseA的另一项科学传奇，RNaseA是蛋白科学史上，“蛋白质一级结构决定高级结构”的来源，人类第一次研究蛋白质变复性，就是针对RNaseA，这个酶，被高温打破结构之后，降温可以很好的恢复结构，恢复酶活。【饶毅同志说，伟大的中国人民在人工合成结晶牛胰岛素的时候，杰出的一代人民科学家邹承鲁进行的牛胰岛素A、B链拆分重组实验，是比RNaseA更早可以得到此结论的研究，可惜没有发表】
现在买来的RNaseA，还是这个程序过来的，只不过交给公司完成了，但是，公司，就有好有坏了。。。
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6楼2014-05-26 09:41:53
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