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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 大肠中异源表达植物基因求助
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哈图萨斯90

铜虫 (初入文坛)

[求助] 大肠中异源表达植物基因求助 已有2人参与

各位虫友大家好，小弟初做异源表达，对这方面知识不是很了解。
我想在大肠杆菌中表达一个植物蛋白酶，这个酶是由两个亚基构成的，分别命名A，B。两个亚基需共表达后才有活性。
小弟不晓得如何同时表达AB两个亚基基因。是否有特殊的载体和菌株或者成熟的异源表达系统？
另外，由于涉及到酶活测定的问题，对蛋白提纯方法亦不是很清楚？还请虫友帮忙解答。
最后，原核表达是否应将信号肽去除？
因为对这方面不了解，所以有些问题问的不是很准确，还请各位虫友多担待。
谢谢大家！感激不尽！！

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 17:25 ]
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1楼 2014-02-15 01:22:54
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哈图萨斯90

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by l68266152 at 2014-02-15 14:52:06
有pET系统的质粒带有两个启动子可同时表达两个蛋白，也可以用多顺反子的方式表达，但后一个亚基一般表达量较低。
一般有HIS等标签用于后期亲和纯化。
要出去信号肽。

我还想追问一下，如果加了HIS标签，会不会影响两个亚基的结合以及后期的酶活测定呢？谢谢
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4楼2014-02-19 22:42:45
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-15 16:54:23
哈图萨斯90: 金币+15, ★★★很有帮助 2014-02-15 18:35:33
有pET系统的质粒带有两个启动子可同时表达两个蛋白，也可以用多顺反子的方式表达，但后一个亚基一般表达量较低。
一般有HIS等标签用于后期亲和纯化。
要出去信号肽。
赞一下 回复此楼
相信自己
2楼2014-02-15 14:52:06
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-15 16:54:29
哈图萨斯90: 金币+5 2014-02-15 18:35:37
应去除信号肽序列
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
3楼2014-02-15 15:24:41
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