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同源重组双交换 自杀质粒pMKS1已有2人参与
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| 用自杀质粒pMKS1对目的基因进行敲除,目的基因大小约15oobp,构建上下游同源臂分别为600多和500多,电转后得到了一些在抗生素上能长的目的菌,但是经过或者不经过松弛培养的目的菌转到蔗糖筛选培养基后就让人很纠结,因为单克隆实在是太多,表型跟野生型也无法区分,每天挑100多个克隆PCR验证都没得到缺失突变体,挑了一周了,请问,我继续挑单克隆还有意义么?在蔗糖这个选择压下,发生双交换的概率到底有多大? |
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yang0071
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