24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3106  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

free-fish

铜虫 (正式写手)

[求助] 同源重组双交换 自杀质粒pMKS1 已有2人参与

用自杀质粒pMKS1对目的基因进行敲除,目的基因大小约15oobp,构建上下游同源臂分别为600多和500多,电转后得到了一些在抗生素上能长的目的菌,但是经过或者不经过松弛培养的目的菌转到蔗糖筛选培养基后就让人很纠结,因为单克隆实在是太多,表型跟野生型也无法区分,每天挑100多个克隆PCR验证都没得到缺失突变体,挑了一周了,请问,我继续挑单克隆还有意义么?在蔗糖这个选择压下,发生双交换的概率到底有多大?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccf821020

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by free-fish at 2014-01-06 10:29:40
你好,请问电转后,携带重组突变同源臂的自杀载体能独立存在于宿主细胞内么?在抗生素上能长的单克隆总是P出比野生型缺失了目的片段长度的条带,而在蔗糖上筛选过的单克隆则与野生型一样的条带...

你好,问题解决了吗?我现在也遇到问题了,我用的是自杀质粒,单交换获得了,但是双交换死活弄不出。传了10代挑了800多株,只有1株是敏感型,经过验证是回复成了野生型的菌株。双交换敲除菌株这么难敲除吗?
5楼2017-09-01 09:45:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
free-fish: 金币+5 2014-01-06 10:26:12
我建议你再筛选个一个周期,
如果还没有的话,考虑放弃比较好
2楼2014-01-06 07:41:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

free-fish

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2014-01-06 07:41:14
我建议你再筛选个一个周期,
如果还没有的话,考虑放弃比较好

你好,请问电转后,携带重组突变同源臂的自杀载体能独立存在于宿主细胞内么?在抗生素上能长的单克隆总是P出比野生型缺失了目的片段长度的条带,而在蔗糖上筛选过的单克隆则与野生型一样的条带
3楼2014-01-06 10:29:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccf821020

新虫 (小有名气)

你好,问题解决了吗?我现在也遇到问题了,我用的是自杀质粒,单交换获得了,但是双交换死活弄不出。传了10代挑了800多株,只有1株是敏感型,经过验证是回复成了野生型的菌株。双交换敲除菌株这么难敲除吗?
4楼2017-09-01 09:44:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿西电085401数一英一299求调剂 六级521 +3 爱吃大鸭梨 2026-03-31 3/150 2026-03-31 11:48 by zhang123zxq
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-31 3/150 2026-03-31 11:32 by 求调剂zz
[考研] 320分,材料与化工专业,求调剂 +10 一定上岸aaa 2026-03-27 14/700 2026-03-31 10:47 by foria
[考研] 南京大学化学调剂 +11 景随风 2026-03-29 16/800 2026-03-31 10:14 by herarysara
[考研] 求调剂 生物学 377分 +4 zzll03 2026-03-31 4/200 2026-03-31 10:07 by zhyzzh
[考研] 0817化工学硕调剂 +7 努力上岸中! 2026-03-31 7/350 2026-03-31 09:58 by nalakaiqi
[考研] 吉大生物学326分求调剂 +3 sunnyupup 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:28 by longlotian
[考研] 各位老师好,我的一志愿为北京科技大学085601材料专硕 +10 Koxui 2026-03-28 10/500 2026-03-30 19:33 by 源_2020
[考研] 311求调剂 +7 蓝月亮亮 2026-03-30 7/350 2026-03-30 19:24 by 无际的草原
[考研] 一志愿厦门大学材料工程专硕354找调剂!!! +5 贝呗钡钡 2026-03-30 5/250 2026-03-30 18:16 by 无际的草原
[考研] 生物技术与工程 +7 1294608413 2026-03-25 8/400 2026-03-30 11:36 by 唐沐儿
[考研] 求调剂 +10 张zz111 2026-03-27 11/550 2026-03-30 09:17 by 无际的草原
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +6 崔wj 2026-03-26 6/300 2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 一志愿南师大0703化学 275求调剂 +4 Ripcord上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-27 17:00 by zhyzzh
[考研] 085601 材料工程 313分 求调剂 +5 Ong3 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:24 by goldfish51
[考研] 考研调剂 +10 呼呼?~+123456 2026-03-24 10/500 2026-03-27 11:46 by wangjy2002
[考研] 机械学硕总分317求调剂!!!! +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
信息提示
请填处理意见