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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 分子克隆里空转载体的目的
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jessttt

金虫 (小有名气)

[求助] 分子克隆里空转载体的目的已有4人参与

1.请问分子克隆里面，凡是构建了重组载体，就一定要同时要做空转载体的对照吗？这个阴性对照是为了说明什么呢，一直都不太明白。。。。
2.怎样检测重组质粒已经成功了--法一：抽提质粒后进行测序？
                                                   法二：用另外的酶去切质粒，然后再测序？？
                                                   法三：请大侠指点。。。。
小虫子刚刚做实验~求亲们指点哈！
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1楼2013-12-29 10:49:21
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周志惠

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-29 17:07:16
我觉得转空载体是为了看看你载体酶切的完全不完全，以及载体有没有自连，这样对于连接产物转化有一定的参照意义。
先自己酶切验证或者菌落PCR验证，自己验证没问题了就可以培养菌体，直接送菌液给测序公司测序
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6楼2013-12-30 09:04:56
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jessttt

金虫 (小有名气)
自己顶一个
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2楼2013-12-29 10:49:35
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-29 22:02:34
1. 空质粒上带有抗性基因，如果是表达质粒，往往还有强启动子或者诱导启动子。这些元件的导入可能对宿主造成未知的影响，只用野生型做对照往往说服力不强，所以需要把空载体导入宿主作为对照。
2. 先自己酶切鉴定，如果酶切图谱正确，说明插入片段很可能是正确的。然后测序验证插入片段的序列没有问题。
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3楼2013-12-29 12:40:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-29 22:02:40
1. 空质粒上带有抗性基因，如果是表达质粒，往往还有强启动子或者诱导启动子。这些元件的导入可能对宿主造成未知的影响，只用野生型做对照往往说服力不强，所以需要把空载体导入宿主作为对照。
2. 先自己酶切鉴定，如果酶切图谱正确，说明插入片段很可能是正确的。然后测序验证插入片段的序列没有问题。
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4楼2013-12-29 12:41:17
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