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蓝默儿

金虫 (小有名气)

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[交流] 单克隆抗体亚克隆的次数

想交流下单克隆抗体制备过程中的亚克隆次数：
1.如果第二次亚克隆，ELISA检测单集落孔全为阳性，是否进行第三次亚克隆。
进行第三次亚克隆筛选杂交瘤细胞会更稳定么，还是杂交瘤细胞容易丢失，细胞逐代养下去，感觉阳性株也是容易丢失的么？

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1楼 2013-12-04 14:20:13

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蓝默儿

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by raohui at 2014-07-25 14:00:27
请问你们亚克隆是怎样具体操作的？我每次亚几乎都是多克隆，单克隆太少，有什么方法可以高效的亚出单个单克隆吗？请指教？

细胞计数时，取细胞悬液0.1ml加入0.9ml台盼蓝染液中，混匀，用血球计数板计数。计算细胞数目的公式为：每毫升细胞数=4个大方格细胞数×105/4；或每毫升细胞数=5个中方格细胞数×106/2，具体你可以再仔细查下

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8楼2014-07-25 20:23:20

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Endless100

木虫 (小有名气)

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★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-04 18:22:17

最好还是进行三次亚克隆，因为这也是筛选稳定细胞株的过程

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2楼2013-12-04 17:31:40

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蓝默儿

金虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by Endless100 at 2013-12-04 17:31:40
最好还是进行三次亚克隆，因为这也是筛选稳定细胞株的过程

第二次亚克隆全部孔都为阳性，且单集落孔有40个，文献上也说，如果稳定进行第三次亚克隆，但杂交瘤在培养的过程中也不是容易染色体丢失？有的时候感觉处理是矛盾的。我是二亚克隆全为阳性，也进行三亚了，也是阳性，但不知道什么原因，三亚的细胞没长起来，长着长着就飘了，然后，脱落，细胞萎缩死亡，先头担心是污染，但几天细胞溶液上清没有浑浊，镜下也不像细菌污染。

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3楼2013-12-06 09:41:24

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