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蓝默儿

金虫 (小有名气)


[交流] 单克隆抗体亚克隆的次数

想交流下单克隆抗体制备过程中的亚克隆次数:
1.如果第二次亚克隆,ELISA检测单集落孔全为阳性,是否进行第三次亚克隆。
进行第三次亚克隆筛选杂交瘤细胞会更稳定么,还是杂交瘤细胞容易丢失,细胞逐代养下去,感觉阳性株也是容易丢失的么?
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Endless100

木虫 (小有名气)


★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-04 18:22:17
最好还是进行三次亚克隆,因为这也是筛选稳定细胞株的过程
2楼2013-12-04 17:31:40
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蓝默儿

金虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by Endless100 at 2013-12-04 17:31:40
最好还是进行三次亚克隆,因为这也是筛选稳定细胞株的过程

第二次亚克隆全部孔都为阳性,且单集落孔有40个,文献上也说,如果稳定进行第三次亚克隆,但杂交瘤在培养的过程中也不是容易染色体丢失?有的时候感觉处理是矛盾的。我是二亚克隆全为阳性,也进行三亚了,也是阳性,但不知道什么原因,三亚的细胞没长起来,长着长着就飘了,然后,脱落,细胞萎缩死亡,先头担心是污染,但几天细胞溶液上清没有浑浊,镜下也不像细菌污染。
3楼2013-12-06 09:41:24
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琪琪a0716

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也正在做单抗,老板要求我做四次亚克隆才可以!
4楼2013-12-17 16:14:35
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wkh310

木虫 (小有名气)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
蓝默儿: 金币+1 2014-04-03 17:40:33
需要进行第三次细胞亚克隆,这样筛选出来的细胞株会更稳定,一般都不会丢失阳性,已经很稳定
5楼2014-04-03 16:34:51
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wkh310

木虫 (小有名气)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
蓝默儿: 金币+1 2014-04-03 17:40:52
蓝默儿: 金币+1 2014-07-25 20:00:59
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蓝默儿 at 2013-12-06 09:41:24
第二次亚克隆全部孔都为阳性,且单集落孔有40个,文献上也说,如果稳定进行第三次亚克隆,但杂交瘤在培养的过程中也不是容易染色体丢失?有的时候感觉处理是矛盾的。我是二亚克隆全为阳性,也进行三亚了,也是阳性 ...

染菌分类好多,细胞上清液没有浑浊,也有可能是支原体染菌,细胞液不会浑浊的,如果不想丢弃细胞也没有办法挽救细胞,建议你将目前生长不好的细胞注射小鼠体内,最后再从小鼠腹腔里面收集细胞。
6楼2014-04-03 16:39:32
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raohui

铁虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问你们亚克隆是怎样具体操作的?我每次亚几乎都是多克隆,单克隆太少,有什么方法可以高效的亚出单个单克隆吗?请指教?
7楼2014-07-25 14:00:27
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蓝默儿

金虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by raohui at 2014-07-25 14:00:27
请问你们亚克隆是怎样具体操作的?我每次亚几乎都是多克隆,单克隆太少,有什么方法可以高效的亚出单个单克隆吗?请指教?

细胞计数时,取细胞悬液0.1ml加入0.9ml台盼蓝染液中,混匀,用血球计数板计数。计算细胞数目的公式为:每毫升细胞数=4个大方格细胞数×105/4;或每毫升细胞数=5个中方格细胞数×106/2,具体你可以再仔细查下
8楼2014-07-25 20:23:20
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wkh310

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果每孔细胞集落差不多大 OD都差不多一样 说明达到了真正的全阳 如果没有这样 建议继续亚克隆 会更稳定  不会丢失的
9楼2015-12-25 14:46:16
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