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蓝默儿

金虫 (小有名气)

[交流] 单克隆抗体亚克隆的次数

想交流下单克隆抗体制备过程中的亚克隆次数：
1.如果第二次亚克隆，ELISA检测单集落孔全为阳性，是否进行第三次亚克隆。
进行第三次亚克隆筛选杂交瘤细胞会更稳定么，还是杂交瘤细胞容易丢失，细胞逐代养下去，感觉阳性株也是容易丢失的么？
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1楼 2013-12-04 14:20:13
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Endless100

木虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-04 18:22:17
最好还是进行三次亚克隆，因为这也是筛选稳定细胞株的过程
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2楼2013-12-04 17:31:40
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蓝默儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Endless100 at 2013-12-04 17:31:40
最好还是进行三次亚克隆，因为这也是筛选稳定细胞株的过程

第二次亚克隆全部孔都为阳性，且单集落孔有40个，文献上也说，如果稳定进行第三次亚克隆，但杂交瘤在培养的过程中也不是容易染色体丢失？有的时候感觉处理是矛盾的。我是二亚克隆全为阳性，也进行三亚了，也是阳性，但不知道什么原因，三亚的细胞没长起来，长着长着就飘了，然后，脱落，细胞萎缩死亡，先头担心是污染，但几天细胞溶液上清没有浑浊，镜下也不像细菌污染。
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3楼2013-12-06 09:41:24
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琪琪a0716

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也正在做单抗，老板要求我做四次亚克隆才可以！
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4楼2013-12-17 16:14:35
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wkh310

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
蓝默儿: 金币+1 2014-04-03 17:40:33
需要进行第三次细胞亚克隆，这样筛选出来的细胞株会更稳定，一般都不会丢失阳性，已经很稳定
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5楼2014-04-03 16:34:51
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wkh310

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
蓝默儿: 金币+1 2014-04-03 17:40:52
蓝默儿: 金币+1 2014-07-25 20:00:59
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蓝默儿 at 2013-12-06 09:41:24
第二次亚克隆全部孔都为阳性，且单集落孔有40个，文献上也说，如果稳定进行第三次亚克隆，但杂交瘤在培养的过程中也不是容易染色体丢失？有的时候感觉处理是矛盾的。我是二亚克隆全为阳性，也进行三亚了，也是阳性 ...

染菌分类好多，细胞上清液没有浑浊，也有可能是支原体染菌，细胞液不会浑浊的，如果不想丢弃细胞也没有办法挽救细胞，建议你将目前生长不好的细胞注射小鼠体内，最后再从小鼠腹腔里面收集细胞。
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6楼2014-04-03 16:39:32
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raohui

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问你们亚克隆是怎样具体操作的？我每次亚几乎都是多克隆，单克隆太少，有什么方法可以高效的亚出单个单克隆吗？请指教？
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7楼2014-07-25 14:00:27
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蓝默儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by raohui at 2014-07-25 14:00:27
请问你们亚克隆是怎样具体操作的？我每次亚几乎都是多克隆，单克隆太少，有什么方法可以高效的亚出单个单克隆吗？请指教？

细胞计数时，取细胞悬液0.1ml加入0.9ml台盼蓝染液中，混匀，用血球计数板计数。计算细胞数目的公式为：每毫升细胞数=4个大方格细胞数×105/4；或每毫升细胞数=5个中方格细胞数×106/2，具体你可以再仔细查下
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8楼2014-07-25 20:23:20
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wkh310

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果每孔细胞集落差不多大 OD都差不多一样 说明达到了真正的全阳 如果没有这样 建议继续亚克隆 会更稳定  不会丢失的
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9楼2015-12-25 14:46:16
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