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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取RNA的试剂配制，水饱和酚里面溶解不了氯化钠啊~~求帮助啊~~
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liangpz

铁虫 (小有名气)

[求助] 提取RNA的试剂配制，水饱和酚里面溶解不了氯化钠啊~~求帮助啊~~ 已有1人参与

最近在试用一新改进的方法提取RNA，文献里面的某提取液为：酸酚((pH 4.5)；2.5 M NaCl；0.5% SDS。

我买了提取RNA用的水饱和酚，可是加入称好的 NaCl和SDS后完全没有办法溶解，搅拌和加热都没有效果，等了一晚，也还是没有溶。

想问问大家，有人用过水饱和酚做溶剂，溶解别的试剂吗？都是怎么溶的啊？？还是说水饱和酚本来就没有办法做溶剂，只能独自使用呢？

好着急，各路大神小神帮帮忙啊~~
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1楼 2013-11-27 11:05:31
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liangpz

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-28 00:33:40
我也不清楚为什么缓冲液II会是这样。通常就直接用酚抽提了。我觉得会不会是先用2.5M NaCl，0.5% SDS去饱和酚，然后用盐和SDS饱和过的酚抽提？...

好的，我会自己再试试，然后也问问作者希望能收到回复。
谢谢~
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5楼2013-11-28 09:53:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-27 12:45:51
liangpz: 金币+3, ★有帮助 2013-11-28 09:53:45
盐这类极性分子怎么会溶解在酚里呢，更何况是2.5M的。我觉得你需要仔细阅读提取方法和试剂。酚一般是用来破碎细胞和抽提蛋白的，在酸性条件下，RNA不溶于酚而溶解在水相里。
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2楼2013-11-27 12:33:51
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liangpz

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-27 12:33:51
盐这类极性分子怎么会溶解在酚里呢，更何况是2.5M的。我觉得你需要仔细阅读提取方法和试剂。酚一般是用来破碎细胞和抽提蛋白的，在酸性条件下，RNA不溶于酚而溶解在水相里。

非常感谢应助
我也觉得在有机相中溶解盐很费解，但是感觉原文就是这个意思啊。
附原文试剂部分：
• Extraction buffer I Cetyl trimethyl ammonium bromide(CTAB, 2% (w/v); Sigma, USA), 3.5 M guanidinethiocyanate (GTC) (Sigma, USA), 100 mM sodiumcitrate buffer (pH 4.5), 3 M Potassium acetate (Sigma,USA), 1.0% sodium dodecyl sulfate (SDS) (Sigma,USA) (added just before the start of experiment) andRNase free water for final volume makeup.

• Extraction buffer IIAcidic phenol (pH 4.5) (Sigma,USA), 2.5 M sodium chloride (Sigma, USA), 0.5%SDS.

• Chloroform: Isoamyl alcohol (24:1)
• 12 M LiCl
• Ethanol (absolute and 70%)
• RNase free water


中间的缓冲液II就是我疑惑的部分，麻烦再帮我看看，难道是我理解错了吗？谢谢了！
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3楼2013-11-27 15:14:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liangpz at 2013-11-27 15:14:06
非常感谢应助
我也觉得在有机相中溶解盐很费解，但是感觉原文就是这个意思啊。
附原文试剂部分：
• Extraction buffer I Cetyl trimethyl ammonium bromide(CTAB, 2% (w/v); Sigma, USA), 3.5 M gu ...

我也不清楚为什么缓冲液II会是这样。通常就直接用酚抽提了。我觉得会不会是先用2.5M NaCl，0.5% SDS去饱和酚，然后用盐和SDS饱和过的酚抽提？
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4楼2013-11-28 00:33:40
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