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赵书生

铜虫 (初入文坛)

[求助] 将筛选的微生物接种到盆栽中的几点疑问

1,筛选出来的菌种是固氮菌,解磷菌,解钾菌。扩大培养的时候是用什么培养液? 还是用原来的还是用LB?培养时间2-3天可以么?  是不是就可以直接接种进去?

2,培养完毕如何确定细菌的数目,因为要接种到盆栽中,如果平板计数的话显然来不及,有什么比较简便易行的方法?

[ Last edited by 赵书生 on 2013-10-30 at 10:12 ]
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yangxin9337

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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赵书生: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-10-30 10:51:28
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2013-10-30 21:17:51
筛选出来的菌种除固氮菌外,以芽孢杆菌为主。扩大培养时,以LB为主既可,固氮菌培养时可适当加些糖。接种时,最好离心收集菌体,缓冲液洗2-3次后用于接种比较好,可排除代谢产物和培养基的干扰。培养完细菌的数目确定,简便的方法是比色法,比较快,但要选择合适的测定波长。
2楼2013-10-30 10:48:49
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yangxin9337

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
赵书生: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-10-30 16:01:15
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2013-10-30 21:18:07
固氮菌查一下文献,好像是YMA培养基,很常见的。缓冲液可用磷酸缓冲液(PH6。5-7。0),也可用TRIS。如用比色法,是要做一下曲线的,但后面测定就比较快了。实际上,直接镜检是最快的了。
4楼2013-10-30 12:37:48
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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赵书生: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-30 16:01:03
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2013-10-30 21:18:24
赵书生: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-31 08:44:08
OD600处比色,调整为0.8-1,此时菌密度在10^8左右。
www------sr-------------
5楼2013-10-30 15:14:07
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 赵书生 at 2013-10-30 16:00:47
恩,之前也看到过   有没有OD值其他范围的菌密度呢?  比色前应该是混匀还是离心?...

一般都是用缓冲液制作菌悬液,混匀,测OD
www------sr-------------
7楼2013-10-30 20:06:34
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赵书生

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yangxin9337 at 2013-10-30 10:48:49
筛选出来的菌种除固氮菌外,以芽孢杆菌为主。扩大培养时,以LB为主既可,固氮菌培养时可适当加些糖。接种时,最好离心收集菌体,缓冲液洗2-3次后用于接种比较好,可排除代谢产物和培养基的干扰。培养完细菌的数目确 ...

那对于固氮菌应该用什么培养基?

离心收集和缓冲液有什么具体的方法可以参考吗?看文献里边貌似没有看到

恩,比色法得先作出曲线来吧~   


多谢~!!!
精彩不亮丽起落是无常
3楼2013-10-30 10:57:43
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赵书生

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2013-10-30 15:14:07
OD600处比色,调整为0.8-1,此时菌密度在10^8左右。

恩,之前也看到过   有没有OD值其他范围的菌密度呢?  比色前应该是混匀还是离心?
精彩不亮丽起落是无常
6楼2013-10-30 16:00:47
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赵书生

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2013-10-30 20:06:34
一般都是用缓冲液制作菌悬液,混匀,测OD...

这方面的内容在哪里能找到比较具体的呢?  因为还会涉及到以后的试验

有推荐的资料或者书么?
精彩不亮丽起落是无常
8楼2013-10-31 08:45:06
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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赵书生: 金币+10, 有帮助, 谢谢了~ 如果方便的话分享下文献~ 2013-10-31 15:28:53
赵书生: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-11-04 10:21:17
引用回帖:
8楼: Originally posted by 赵书生 at 2013-10-31 08:45:06
这方面的内容在哪里能找到比较具体的呢?  因为还会涉及到以后的试验

有推荐的资料或者书么?...

这个我没有,都是从文献的试验方法中看到的
www------sr-------------
9楼2013-10-31 14:45:12
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

http://www.cnki.net/KCMS/detail/ ... DNQVjEyN0ZyRzVIdEg=
http://www.cnki.net/KCMS/detail/ ... ElSOGVYMUx1eFlTN0Q=
中都有菌悬液的制作方法,详细的我一时也找不到,平时只是浏览过,没做标记,你可以多找找促生菌(PGPR)相关的文献,里面一般都会涉及菌悬液制作的,关于OD值与菌体密度的对应关系,别人的经验只能做个参考,毕竟不同菌之间还是会有不同的,最好把你自己的菌涂板看下菌数。
www------sr-------------
10楼2013-11-01 20:38:09
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