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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 将筛选的微生物接种到盆栽中的几点疑问
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赵书生

铜虫 (初入文坛)

[求助] 将筛选的微生物接种到盆栽中的几点疑问

1，筛选出来的菌种是固氮菌，解磷菌，解钾菌。扩大培养的时候是用什么培养液？ 还是用原来的还是用LB？培养时间2-3天可以么？  是不是就可以直接接种进去？

2，培养完毕如何确定细菌的数目，因为要接种到盆栽中，如果平板计数的话显然来不及，有什么比较简便易行的方法？

[ Last edited by 赵书生 on 2013-10-30 at 10:12 ]
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xiaojuan1207

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精彩不亮丽起落是无常
1楼 2013-10-30 09:46:02
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yangxin9337

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
赵书生: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-10-30 10:51:28
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-10-30 21:17:51
筛选出来的菌种除固氮菌外，以芽孢杆菌为主。扩大培养时，以LB为主既可，固氮菌培养时可适当加些糖。接种时，最好离心收集菌体，缓冲液洗2-3次后用于接种比较好，可排除代谢产物和培养基的干扰。培养完细菌的数目确定，简便的方法是比色法，比较快，但要选择合适的测定波长。
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2楼2013-10-30 10:48:49
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yangxin9337

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
赵书生: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-10-30 16:01:15
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-10-30 21:18:07
固氮菌查一下文献，好像是YMA培养基，很常见的。缓冲液可用磷酸缓冲液（PH6。5-7。0），也可用TRIS。如用比色法，是要做一下曲线的，但后面测定就比较快了。实际上，直接镜检是最快的了。
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4楼2013-10-30 12:37:48
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
赵书生: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-30 16:01:03
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-10-30 21:18:24
赵书生: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-10-31 08:44:08
OD600处比色，调整为0.8-1，此时菌密度在10^8左右。
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www------sr-------------
5楼2013-10-30 15:14:07
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 赵书生 at 2013-10-30 16:00:47
恩，之前也看到过   有没有OD值其他范围的菌密度呢？  比色前应该是混匀还是离心？...

一般都是用缓冲液制作菌悬液，混匀，测OD
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www------sr-------------
7楼2013-10-30 20:06:34
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普通回帖

赵书生

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yangxin9337 at 2013-10-30 10:48:49
筛选出来的菌种除固氮菌外，以芽孢杆菌为主。扩大培养时，以LB为主既可，固氮菌培养时可适当加些糖。接种时，最好离心收集菌体，缓冲液洗2-3次后用于接种比较好，可排除代谢产物和培养基的干扰。培养完细菌的数目确 ...

那对于固氮菌应该用什么培养基？

离心收集和缓冲液有什么具体的方法可以参考吗？看文献里边貌似没有看到

恩，比色法得先作出曲线来吧~   


多谢~！！！
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精彩不亮丽起落是无常
3楼2013-10-30 10:57:43
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赵书生

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2013-10-30 15:14:07
OD600处比色，调整为0.8-1，此时菌密度在10^8左右。

恩，之前也看到过   有没有OD值其他范围的菌密度呢？  比色前应该是混匀还是离心？
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精彩不亮丽起落是无常
6楼2013-10-30 16:00:47
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赵书生

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 贤愚Libra at 2013-10-30 20:06:34
一般都是用缓冲液制作菌悬液，混匀，测OD...

这方面的内容在哪里能找到比较具体的呢？  因为还会涉及到以后的试验

有推荐的资料或者书么？
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精彩不亮丽起落是无常
8楼2013-10-31 08:45:06
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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赵书生: 金币+10, ★有帮助, 谢谢了~ 如果方便的话分享下文献~ 2013-10-31 15:28:53
赵书生: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-11-04 10:21:17
引用回帖:
8楼: Originally posted by 赵书生 at 2013-10-31 08:45:06
这方面的内容在哪里能找到比较具体的呢？  因为还会涉及到以后的试验

有推荐的资料或者书么？...

这个我没有，都是从文献的试验方法中看到的
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9楼2013-10-31 14:45:12
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贤愚Libra

银虫 (正式写手)
http://www.cnki.net/KCMS/detail/ ... DNQVjEyN0ZyRzVIdEg=
http://www.cnki.net/KCMS/detail/ ... ElSOGVYMUx1eFlTN0Q=
中都有菌悬液的制作方法，详细的我一时也找不到，平时只是浏览过，没做标记，你可以多找找促生菌（PGPR）相关的文献，里面一般都会涉及菌悬液制作的，关于OD值与菌体密度的对应关系，别人的经验只能做个参考，毕竟不同菌之间还是会有不同的，最好把你自己的菌涂板看下菌数。
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10楼2013-11-01 20:38:09
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