24小时热门版块排行榜    

查看: 863  |  回复: 4

xubajia

铁虫 (初入文坛)


[交流] 重叠PCR出问题,求大神指点

我在做重叠PCR的时候第一步P出来了,后来割胶回收,用的是EB缓冲液洗脱的,然后以割胶回收产物为模板进行第二步PCR,结果没有P出来。不知是什么原因。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-29 18:30:53
你设计的重叠区域多大,一般至少15bp以上
胶回收效率太低
变性时间适当延长,退火时间也是
循环数增加至35~40
2楼2013-10-21 10:22:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xikexiao

禁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖内容被屏蔽

3楼2013-10-22 09:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xubajia

铁虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2013-10-21 10:22:29
你设计的重叠区域多大,一般至少15bp以上
胶回收效率太低
变性时间适当延长,退火时间也是
循环数增加至35~40

30bp重叠区域应该算比较长了吧?回收效率还不错,回收产物跑胶后还挺亮的。但就是p不出来!
4楼2013-11-19 16:04:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
第一轮产物要稀释后作为第二轮模版用,最好稀释个梯度

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2013-11-19 16:54:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xubajia 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 302求调剂 +6 呼呼呼。。。。 2026-03-17 6/300 2026-03-17 23:56 by 星空星月
[考研] 311求调剂 +9 冬十三 2026-03-15 10/500 2026-03-17 22:53 by lbsjt
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +3 困于星晨 2026-03-17 3/150 2026-03-17 14:08 by ms629
[考研] 289求调剂 +6 步川酷紫123 2026-03-11 6/300 2026-03-17 10:23 by Sammy2
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化,一志愿:哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 复试调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 求调剂(材料与化工327) +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 工科,求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见