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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重叠PCR出问题，求大神指点
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xubajia

铁虫 (初入文坛)

[交流] 重叠PCR出问题，求大神指点

我在做重叠PCR的时候第一步P出来了，后来割胶回收，用的是EB缓冲液洗脱的,然后以割胶回收产物为模板进行第二步PCR,结果没有P出来。不知是什么原因。
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1楼 2013-10-20 16:54:13
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yang0071

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 18:30:53
你设计的重叠区域多大，一般至少15bp以上
胶回收效率太低
变性时间适当延长，退火时间也是
循环数增加至35~40
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2楼2013-10-21 10:22:29
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xikexiao

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
3楼2013-10-22 09:52:49
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xubajia

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2013-10-21 10:22:29
你设计的重叠区域多大，一般至少15bp以上
胶回收效率太低
变性时间适当延长，退火时间也是
循环数增加至35~40

30bp重叠区域应该算比较长了吧？回收效率还不错，回收产物跑胶后还挺亮的。但就是p不出来！
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4楼2013-11-19 16:04:52
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
第一轮产物要稀释后作为第二轮模版用，最好稀释个梯度

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-11-19 16:54:25
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